实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
大鼠脑微血管内皮细胞分离自脑组织；脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，它是组成脑微血管腔面单层扁平上皮样细胞，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑，大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在脑血管的发病机制中有重要病理生理学意义。与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于研究的相关组织。其主要特征如下：①脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；②脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；③脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生“两极分化”的表现型。
组织来源
产品规格
货号
用途
脑组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1697
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 内皮细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的大鼠脑微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的大鼠脑微血管内皮细胞经CD31荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
Mouseanti-toxoplasmosisIgMAntibodyELISAkit
大鼠Apelin(APLN)elisa分析检测试剂盒
APLN ELISA Kit
人肝X受体α(LXRα)elisa分析检测试剂盒
LXRαELISAKit
大鼠脂肪甘油��酯脂酶(ATGL)elisa检测试剂盒
IKB-ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒
小鼠γ突触核蛋白(SNCG)elisa检测试剂盒免费代测
仓鼠白介素1α(IL-1α)elisa检测试剂盒免费代测
人类状瘤病毒18 E7抗体
HPV18 E7
促肾上腺皮质受体
ACTHR
犬促肾上皮质释放(CRH)elisa分析检测试剂盒
血液乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒
小鼠赖氨酰氧化酶(LOX)elisa检测试剂盒
大鼠泛素结合酶UBC5 elisa分析检测试剂盒
原钙粘蛋白γA7抗体
PCDHGA7
组织蛋白酶S抗体
Cathepsin S
TGF-β诱导早期应答基因1抗体 Anti-TIEG1/KLF10
配对盒基因2抗体 Anti-PAX2
过氧化还原酶1抗体 Anti-PRDX1
调控周期蛋白依赖蛋白激酶SEI2抗体 Anti-SERTAD2
Cy5标记的羊抗小鼠IgG H&L
大鼠脑微血管内皮细胞Goat Anti-Mouse IgG H&L / Cy5
四连接素TN抗体
AATC_HUMAN; Aspartate aminotransferase 1; Aspartate aminotransferase; Aspartate aminotransferase cytoplasmic; Aspartate aminotransferase cytosolic; cytoplasmic; ec 2.6.1.1; GIG 18; GIG18; Glutamate oxaloacetate transaminase 1; Glutamate oxaloacetate transaminase soluble; Glutamic oxaloacetic transaminase 1 soluble; GOT 1; GOT1; Growth inhibiting protein 18; SGOT; Transaminase a.
大鼠膀胱平滑肌细胞
小鼠主动脉内皮细胞
COLO320 DM 人结直肠腺癌细胞
AML-193 人急性单核细胞白血病
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；