实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
大鼠胰腺星状细胞分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。纤维化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星状细胞（PSC）是胰腺纤维化的主要效应细胞，PSC分离和成功培养是体外研究胰腺纤维化的重要前提。未活性化的PSC胞浆中富含维A脂滴，并表达Desmin蛋白，活化后的PSC则表达α-平滑肌肌动蛋白（alpha-SMA）。PSC具有静息态与激活态两种，并分别具有特异的标志物。静息状态PSC胞质内富含的维生素A脂滴可以被油红O染成红色，阳性表达Desmin。激活状态PSC阳性表达alpha-SMA。油红O染色发现，原代分离的细胞培养6d，胞浆中仍可见明显的脂滴，传代后，橙红色的脂滴颗粒显著减少甚至消失。细胞化学染色显示，细胞接种24h仍然表达Desmin，48h后Desmin基本不再表达。培养48h后绝大多数细胞开始表达alpha-SMA，随着培养时间的增长和传代次数的增加，细胞表达alpha-SMA，而不再表达Desmin，说明细胞活化。提示PSC接种24h后即启动了激活过程，至培养第6d大多数细胞激活，传代后细胞处于高度激活状态。原代胰腺星状细胞可作为慢性胰腺炎新药的细胞筛选模型，目前研究发现：胰腺受损时，在各种刺激因子作用下使胰腺星状细胞活化，导致细胞形态、功能发生变化，促使基质增生、胶原蛋白的大量**及不规则沉积。
组织来源
产品规格
货号
用途
胰腺组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1609
仅供科研研究实验
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的大鼠胰腺星状细胞采用胶原酶制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的大鼠胰腺星状细胞经α-SMA、Desmin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
IL-12/P70ELISAKIT
鱼多巴胺(DA)elisa分析检测试剂盒
DA ELISA kit
人并殖吸虫抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒
HumanAnti-ParagonimusantibodyIgGELISAkit
小鼠3-α羟基类固醇脱氢酶(Akr1c9)elisa检测试剂盒
RHODAMINE 110蛋白标记试剂盒
冰冻切片茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒
鸡HSP27 IgM 抗体elisa检测试剂盒
层粘连蛋白β2抗体
Laminin Beta 2
Bcl-2源结构域样蛋白1抗体
BECN1L1
分选连接蛋白9抗体 Anti-SNX9/SH3PX1
呼吸道合胞抗体 Anti-RSV
线粒体复合物NDUFS4蛋白抗体 Anti-NDUFS4
调节蛋白1抗体 Anti-ZHX2
剪接因子1重组兔单克隆抗体
SF1
间隙连接蛋白30.3抗体
Connexin 30.3
肌浆/内质网钙ATP酶2抗体 Anti-Serca2/SERCA2 ATPase
PDZ结构域PDZK6蛋白抗体 Anti-PDZD6
磷酸核糖胺咪唑羧化酶抗体 Anti-PAICS
磷酸化血管**素受体2抗体 Anti-Phospho-Tie2 (Ser1119)
羊抗人IgM抗血清
大鼠胰腺星状细胞Goat Anti-Human IgM whole serum
锌指蛋白738抗体
CD225; CD225 antigen; CD 225; CD-225; IFI17; Interferon induced protein 17; Interferon induced transmembrane protein 1; Interferon inducible protein 9-27; Interferon-induced protein 17; Interferon-induced transmembrane protein 1; Interferon-inducible protein 9-27; Leu 13 antigen; Leu-13 antigen; LEU13; IFM1_HUMAN; Dispanin subfamily A member 2a; DSPA2a.
大鼠真皮毛细胞
小鼠输尿管上皮细胞
HPAC人胰腺癌细胞
C2C12小鼠成肌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；