实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
人肝内胆管上皮细胞分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也**消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。通过控制调控的分泌和吸收，在保持、调整和扩大胆小管的结构中发挥重要作用，肝内胆管上皮细胞在先天性和获得性应答方面起着积极作用。肝内胆管上皮细胞约占肝细胞总数的5%，其在肝内胆道系统内形成复杂的网状管形结构。肝内胆管上皮细胞具有复杂的生理代谢功能，参与肝脏的代谢、排泌、等生理过程，在肝脏的发展过程中起一定的作用。研究表明，常见的肝内胆管病变例如原发性硬化性胆管炎、胆管癌等，都是以肝内胆管上皮细胞为病变靶位，进而引起肝内胆管上皮损伤。因此，了解正常肝内胆管上皮细胞的生物学特征和病变肝内胆管上皮细胞的病理特征对研究肝内胆管病变的发病机制、诊断和具有重要意义。
组织来源
产品规格
货号
用途
肝脏组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1297
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的人肝内胆管上皮细胞采用胶原酶灌注消化法后，再用胶原酶-DNA酶联合消化，接种至预先包被鼠尾胶原的培养瓶中，通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的人肝内胆管上皮细胞经Cytokeratin-19荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
载玻片细胞线粒体复合物IV蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
脂肪酸合成酶（FAS）测试盒
大鼠肾病蛋白(nephrin)elisa检测试剂盒
线虫甲基磺酸甲酯（MMS）诱导突变试剂盒
豚鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)elisa分析检测试剂盒
果糖测试盒 50管/48样 紫外比色法
TEM电镜冰冻切片组织化学HRP酶联DAB基础检测试剂盒
小鼠催乳素(PRL)elisa检测试剂盒
大鼠F-肌动蛋白elisa检测试剂盒
EPB41L1蛋白抗体 EPB41L1
FAM25A蛋白抗体 FAM25A
磷酸化突触融合蛋白1抗体 phospho-Syntaxin 1a (Ser188)
磷酸化真核延伸因子激酶2抗体 Phospho-EEF2k (Ser359)
促卵泡刺抗体 FSH beta
蛋白甘露糖基转移酶1抗体 POMT1
锌指蛋白447抗体 ZNF447
锌指蛋白786抗体 ZNF786
PE标记人CD11b单克隆抗体 human CD11b/PE
PGBD3蛋白抗体 PGBD3
脱氢酶13抗体 RDH13
瞬时表达轴索糖蛋白1抗体 TAG1
环指蛋白2抗体 RING2
肌间蛋白3抗体 MYOM3
组蛋白H1.2抗体 Histone H1.2
1号染色体开放阅读框191抗体 C1orf191
人蛋白磷酸酶自身抗体elisa分析检测试剂盒
人肝内胆管上皮细胞细胞PKCι激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
小鼠神经肽Y(NP-Y)elisa检测试剂盒
pan-cytokeratin; pan-CK; pan CK; P-CK; CK-PAN; wide spectrum Cytokeratin; Cytokeratins; [cytokeratins 1,2,4,5,6,7,8,71,72,75,78].
人肝实质细胞
小鼠肾上腺髓质细胞
K562人慢性骨髓性白血病细胞系
calu-6人退行性癌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；