实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
人骨骼肌细胞分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞，细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。
组织来源
产品规格
货号
用途
骨骼肌组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1407
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件 PLL（0.1mg/ml）
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的人骨骼肌细胞采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的人骨骼肌细胞经α-Sarcometric actin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
马白介素1β(IL-1β)elisa分析检测试剂盒
大鼠羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)elisa检测试剂盒
OXALATE（氨钾盐）血液抗凝液
土壤中性磷酸酶(S-NP)测试盒
通用型马铃薯卷叶病毒（Potato Leafroll Virus；PLRV）
大鼠血小板因子3(PF-3)elisa检测试剂盒
TNF ALPHA蛋白共沉淀分析试剂盒
小鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)elisa检测试剂盒
DNA银染试剂盒 20T
碳酸酐酶1重组兔单克隆抗体 Carbonic Anhydrase I
源盒蛋白D4抗体 HOXD4
RAGE重组兔单克隆抗体 RAGE
Rho鸟苷酸交换因子2抗体 GEF H1
2号染色体开放阅读框84抗体 C2orf84
6号染色体开放阅读框163抗体 C6orf163
基质金属蛋白酶-1抗体 MMP-1
甲基转移酶样蛋白10抗体 Methyltransferase like 10
烟碱型乙酰胆碱受体α10/AChRα10抗体 CHRNA10
胰岛素样生长因子结合蛋白1抗体 IGFBP1
电压门控性钾通道蛋白亚基kv6.1抗体 KCNG1
多聚腺苷酸特异性核糖核酸抗体 PARN
FITC标记小鼠CD106单克隆抗体 mouse CD106/FITC
FXYD3蛋白抗体 FXYD3
氯离子通道KB抗体 CLCNKB
内质网膜蛋白UNC93B抗体 UNC93B
细胞磷脂酶D（Phospholipase D）总活性荧光定量检测试剂盒
人骨骼肌细胞人二氢嘧啶脱氢酶[NADP+](DPYD)elisa检测试剂盒
大鼠高密度脂蛋白（HDL）elisa检测试剂盒
Endopeptidase 2; Endopeptidase-2; Mep1a; MEP1A_HUMAN; Meprin A alpha (PABA peptide hydrolase); Meprin A alpha subunit precursor; Meprin A subunit alpha; N benzoyl L tyrosyl P amino benzoic acid hydrolase alpha subunit; N-benzoyl-L-tyrosyl-P-amino-benzoic acid hydrolase subunit alpha; PABA peptide hydrolase; PPH alpha; PPHA.
人骨髓间充质干细胞
小鼠肾间质成纤维细胞
KG-1人急性髓性白血病细胞
CaSKi人宫颈癌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；