实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。
二、实体组织材料的分离方法
对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
大鼠肺微血管周细胞
细胞简介：
肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。它还具有代谢功能，可以执行一定的非呼吸功能。在肺损伤中，肺微血管内皮细胞是活性氧类的重要靶细胞之一。在肺炎的发生过程中，神经体液介质和氧化剂作用于内皮细胞，使得细胞间隙渗透性增加，蛋白质由血液进入间质。细胞间隙渗透性的增加导致低氧血症，出现呼吸窘迫综合征和非心源性肺水肿。
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组织来源
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产品规格
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货号
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用途
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肺组织
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5×105cells/T25细胞培养瓶
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A01X1526
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仅供科研研究实验
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细胞特性：
1）细胞来源于实验动物的正常肺组织。
2)细胞鉴定：血管假性血友病因子（vWF）荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养。
推荐培养基
我们推荐使用 Delf 原代周 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。
公司正在出售的产品：
MouseEotaxin2ELISAKit
大鼠补体因子D(adipsin)(CFD)elisa分析检测试剂盒
CFD ELISA kit
人病毒(PV)抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒
HumanPoliomyelitisVirus(PV)antibodyIgGELISAKit
线粒体功能詹纳斯绿B（JGB）染色试剂盒
大鼠胰岛衍生蛋白3α(REG3α)elisa检测试剂盒
通用型艰难梭菌（Clostridium difficile）基因检测试剂盒
小鼠β内酰胺酶抑制剂(BLI)elisa检测试剂盒
鱼胰岛素样生长因子II(IGF2)elisa分析检测试剂盒
IGF2 ELISA kit
人垂草扁桃酸(VMA)elisa分析检测试剂盒
HumanVMAELISAKit
人EB病毒核抗原3A抗体(IgM)elisa检测试剂盒
细胞CASEIN KINASE 1δ激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
小鼠趋化因子配体1(CCL1)elisa分析检测试剂盒
大鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)elisa分析检测试剂盒
抑癌基因NDRG4抗体
NDRG4
细胞外基质蛋白FREM2抗体
FREM2
转移生长因子β3（TGFβ3）抗体 Anti-TGF beta 3
p53诱导核蛋白1抗体 Anti-p53 DINP1
转录因子OTX1抗体 Anti-OTX1
第10号染色体开放阅读框27抗体 Anti-C10orf27/SPATIAL
Cy7标记的兔抗猴IgM
大鼠肺微血管周细胞Donkey Anti-Rabbit IgG H&L / PE
锌指蛋白AN1-D3抗体
Telomerase catalytic
subunit; EST2; hEST2; TCS1; Telomerase associated protein 2; Telomere Reverse
Transcriptase; TP2; TRT; Telomerase reverse transcriptase; Telomerase Catalytic
Subunit; Telomerase-associated protein 2; TERT_HUMAN.
大鼠肺微血管周细胞
兔冠状动脉内皮细胞
UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞
LNCaP C4-2B人前列腺癌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净；
（3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中；
（4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
（6）种植组织块：将上述组织使用2X双抗冰冷PBS洗涤3次，每次5min，然后使用完全培养基（含有1X双抗）洗涤一次。经过的心脏破碎组织块经过离心后，可以用细头
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的
盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
（8）贴壁细胞传代：当单个细胞从组织块爬出面积在组织块3-5倍，进行传代，此时可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化组织块爬出的细胞，消化时间根据正常细胞消化时间即可，当然可以在消化过程中不断管擦爬出细胞的皱缩情况，一旦达到消化完成（皱缩细胞≥70%）即可使用完全培养基终止消化。在吹打单个细胞时候，一定要轻柔/缓慢，不能吹打到组织块，如果组织块掉下来，大概率是不会再贴壁成功啦。
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；
（9）鉴定：细胞在传代至代、第五代、第十代时候可以将部分细胞进行鉴定，鉴定办法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式细胞术等。
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