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产品资料

大鼠输尿管平滑肌细胞

大鼠输尿管平滑肌细胞
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  • 产品名称:大鼠输尿管平滑肌细胞
  • 产品型号:
  • 产品展商:抚生
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简单介绍
大鼠输尿管平滑肌细胞公司正在出售的产品:SF126 白细胞介素28A抗体 HLNL ELISA Kit 羟基赖正己氨酸检测试剂盒 α内磺肽抗体 SNU-81人结肠癌细胞
产品描述
大鼠输尿管平滑肌细胞

细胞简介:


输尿管位于腹膜后,为一肌肉粘膜所组成管状结构,上起自肾盂,下终止于膀胱三角。输尿管管壁分为 4层:黏膜表面、固有层、输尿管肌层和外膜。其中,肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成。

组织来源

产品规格

货号

用途

输尿管组织

5×105cells/T25细胞培养瓶

A01X1592

仅供科研研究实验

细胞特性:

1)组织来源于实验动物的正常输尿管组织。

2)细胞鉴定:平滑肌肌动蛋白(α-SMA)荧 光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%

4)不含有 HIV-1 HBVHCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。

推荐培养基

我们推荐使用 Delf 原代平滑肌 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验具体步骤:


(1)动物福利:小鼠麻醉牺牲/处死,或者断颈处死;
(2)小鼠:可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次,或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min,然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净;
(3)取出心脏组织:用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔,取出心脏组织,置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中;
(4)组织:在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二,充分洗涤里边的血液,/3次,每次5min;
(5)破碎组织:使用眼科钳或者剪刀,将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块;(备注:如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min,

利于后期细胞从组织块中爬出来,同时能够消除部分结缔组织等)

(6)种植组织块:将上述组织使用2X双抗冰冷PBS洗涤3次,每次5min,然后使用完全培养基(含有1X双抗)洗涤一次。经过的心脏破碎组织块经过离心后,可以用细头

镊子将组织块种植于培养皿中(备注:破碎组织块可能还含有液体,可以在一个无菌培养皿底沾几下,把液体);种植完成后,可以将培养皿正置3-5小时,然后更换培养皿的
盖子正置放置过夜(也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜);


(7)培养基培养:将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基,然后在恒温潮湿细胞培养箱(37℃,5% CO2)培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况,一般3-5 day能够达到传代的爬出效率;

(8)贴壁细胞传代:当单个细胞从组织块爬出面积在组织块3-5倍,进行传代,此时可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化组织块爬出的细胞,消化时间根据正常细胞消化时间即可,当然可以在消化过程中不断管擦爬出细胞的皱缩情况,一旦达到消化完成(皱缩细胞≥70%)即可使用完全培养基终止消化。在吹打单个细胞时候,一定要轻柔/缓慢,不能吹打到组织块,如果组织块掉下来,大概率是不会再贴壁成功啦。

根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中;

(9)鉴定:细胞在传代至代、第五代、第十代时候可以将部分细胞进行鉴定,鉴定办法包括:RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式细胞术等。

实验方法:

一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可根据需要收获目的细胞。
二、实体组织材料的分离方法
对于实体组织材料,由于细胞间结合紧密,为了使组织中的细胞充分分散,形成细胞悬液,可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。其中,机械分散法的特点是简便、快速,但对组织机械损伤大,而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块(或糊状),应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动,使团块膨松,由块状变成絮状,此时再采用机械法,用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡,使细胞团块得以较充分的分散,制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液,接种培养后,细胞容易贴壁生长。

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