血清样本处理:
1、血清细胞培养上清
血清细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
2、血清细胞裂解液
1)吸去培养板内的培养基,用消化血清细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2)收集血清细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
3)加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
4)将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
3、血清
血清血清是zui常用于ELISA试剂盒检测的一类样本,处理也比较简单。
用无热原、无内毒su的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。(将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA试剂盒检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免xi菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
4、血浆
用含血清的或离心管采��血液标本,标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
常用的抗凝剂为EDTA、和等,检测时还应仔细阅读试剂盒说明书,检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。