简述单层贴壁细胞的冻存流程：
1、确保细胞符合冻存标准——a) 外观健康，形态学特征良好；b) 处于生长对数期；c) 无污染。
2、准备冻存管，每瓶细胞准备一支冻存管（冻存液配比=600μl培养基:300μl血清:100μl DMSO）。
3、胰酶消化，转移至离心管，准备离心
4、离心时，可加适量血清（5~10%）；
5、离心完成后，去除上清液，使用1200ul培养基吹匀离心管内细胞；
6、离心管内加入600μl血清，小心吹匀，减少气泡产生；
7、逐滴加入DMSO共200μl（DMSO溶于水时大量放热，避免局部过热导致细胞热损伤），小心吹若干下，混匀液体；
8、转移细胞悬液进入冻存管，1ml/管，共2管；
9、冻存管梯度冷冻——4℃ 0.5h；-20℃ 2h冻存至固态；-80℃冰箱或液氮罐口（亦为-80℃）过夜，第2日再将冻存管没入液氮。或使用梯度冻存盒，常温下放入盒中，移入-80冰箱过夜，次日没入液氮