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组织细胞培养分离技术

组织细胞的分离:

1、离心分离法组织材料为血液、羊水、胸水、腹水,低速800-1000转/分,5-10分钟。

2、机械分离法

(1)剪切分散法,在进行组织块移植培养时,使用该法

(2)机械分散法纤维成份很少的组织进行培养时采用的分离方法,如脑组织、部分胚胎组织以及一些肿瘤组织。

3、消化分离法

(1)胰蛋白酶法作用机理:作用于蛋白质的肽键,使蛋白质水解。适用于消化细胞间质较少的软组织,还可适用于传代细胞培养。作用因素:pH值、温度、浓度、时间、组织块类型。钙、镁、血清对其有抑制作用

(2)胶原酶法,对胶原的消化作用很强,适用于纤维性组织、上皮及癌组织

(3)EDTA法,EDTA(乙二胺四乙酸)是一种非酶性消化物,作用机制:可从组织环境中吸取钙、镁离子,形成络合物,利用结合后的机械力使细胞变圆而促进细胞相互分离