双抗体夹心法操作步骤为：
1、 先加入抗体，使抗体固定结合于载体表面；
2、 再加样品，使目标检测抗原形成抗原-抗体复合物；
3、 加酶标抗抗体（第2种动物抗抗原的酶标抗体）；
4、 加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗原的量成正比。