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贴壁细胞传代过程

贴壁细胞传代过程(以一个T25瓶为例):
1、 吸出原培养液;
2、 加入2ml左右PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃;
3、 加入1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞,放入培养箱消化;
4、 消化时间跟据细胞特性有所不同,显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆,侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化,全程不要拍打培养瓶;
5、 加入3ml含血清的培养基终止消化,吹打细胞使之脱落并在液体里反复吹打使细胞,使之尽量呈单颗细胞的悬浮液,这时可以在显微镜看下;
6、 收集细胞悬液离心,1200rpm(约250g) 3分钟,离心完吸出上清丢弃。
7、 加入新鲜培养基,吹打几下混匀细胞即可,按需接种到新培养瓶,补足培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。
8、 检查培养箱二氧化碳,温度和水盘。