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ELISA试剂盒的使用要求

  ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。ELISA属固相免 疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。

       这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA试剂盒反应总是需要一定时间的温育。

      温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的**可达ding 峰。

      为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻di,在放射免 疫测定中多使反应在冰箱中放置一晚,以形成多的沉淀。但因所需时间太长,在ELISA试剂盒实验中一般不予采用。

      若用保温箱,ELISA试剂盒的ELISA板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育,反应板均不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。