当培养原代细胞时,重要的是要记住,他们不是细胞系,不能同等对待。这里有六个在原代细胞培养中的常见错误,以及如何纠正这些错误。供大家参考。
错误1:一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间
纠正1:原代细胞对解冻过程非常敏感,因此将小瓶置于37℃水浴中,保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶,并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪,以便可以立即用于接种细胞,并置于培养箱中。
错误2:解冻match小瓶后直接离心原代细胞
纠正2:我们不建议在解冻后离心细胞,因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住,在恢复原代细胞后的第2天更换培养基以去除任何残留的DMSO。
错误3:允许原代细胞变得过于融合
纠正3:当生长至100%汇合时,原代细胞可以变得衰老。记住,原代细胞不是100%纯,因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95%融合时,对原代细胞进行传代培养。
错误4:传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化
纠正4:当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后*中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。