ELISA试剂盒加样的具体过程，即加标本，加酶物，加底物。
冻住血清融解后，蛋白质有些浓缩，散布不均，应充沛混匀宜轻缓，防止气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上激烈振动。制备血浆标本需借助于抗凝剂， 而血清标本只要待血清天然凝结、缩短后即可获得。也可在板孔中参加稀释液，再在其参加血清标本，然后在微型震动器上震动1分钟以确保混和。通常说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超越一星期测定的需低温冰存。可用作ELISA测定的标本非常广泛，体液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、大便)等均可作标本以测定其间某种抗体 或抗原成份，ELISA试剂盒中本次实验不需用的有些应及时放回冰箱保存。
ELISA试剂盒血清标本可按惯例办法收集，应留心防止溶血，红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本也许会增加非特异性显色。如在冰箱中保存过久，其间的可发作聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。板式ELISA各个操作过程的留心要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特别仪器合作使用，严格遵循划定操作，必能得出的成果。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不行溅起，不行产愤慨泡。有此测定(如间接法ELISA)需用稀的血清，可在试管中按划定的稀释度稀释后再加样。
ELISA试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学维修通常均用板式点。除特别情况外，在医学维修中均以血清作为检查标本。加酶物使用液和底物用液时可用定量多道加液器，使加液过程敏捷完结。如有细 菌污染，菌体中也许富含内源性HRP，也会产生假阳性反应。每次加标本应更换吸嘴，以发作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加样。杰出的仪器和的操作是确保ELISA试剂盒检查成果牢靠的必要条件。ELISA顶用的蒸馏 水或去离子水，包含用于洗刷的，应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定(如血清 、尿液)，有些则需经预处理(如大便和某些分泌物)。