ELISA测定中出现问题的可能原因(非试剂盒本身的原因)，总结如下:
1、弱阳性质控样本检测不出温育的时间或温度不够;显色反应时间太短;所用配制缓冲液的蒸馏水有问题。
2、测定的重复性差，这是由于测定操作引起的问题，包括
①加样本及试剂量不准;孔间不一致
②加样过快，孔间发生污染
③加错样本
④加样本及试剂时，加在孔壁
⑤不同批号试剂盒中组分混用
⑥温育时间、洗板、显色时间不一致
⑦孔内污染杂物，
血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性等。
3、全部孔都不显色
①漏加酶结合物;
②洗板液配制中出现问题
③漏加显色剂A或B
④终止剂当显色剂使用
4、全部板孔均有显色
①板不干净
②显色液变质
③洗板液受酶等污染