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己糖激酶检测试剂盒检测原理
己糖激酶(Hexokinase)广泛存在于动植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径中控制葡萄糖代谢速率的**个关键酶,可催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖,在机体代谢过程中发挥着重要作用。
己糖激酶可催化葡萄糖和ATP**葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)和ADP,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)可催化葡萄糖-6-磷酸脱氢**6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同时使NADP+还原成NADPH,NADPH在340 nm处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可表征己糖激酶的活性。
己糖激酶检测原理
测定过程中所需要的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿(光径=1 cm)/96孔UV板、研钵/匀浆器、可调式移液器/多道移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备(可根据预实验结果适当调整样本量和比例)
①**或细胞:离心收集**或细胞至离心管内,按照**或细胞数量(10个):提取液体积(mL)为(500-1000):1的比例(建议500万**或细胞加入1 mL提取液)处理样品,冰浴超声破碎(功率20%或200 W,超声3 s,间隔10 s,重复30次),4℃ 8000 g离心10 min,取上清置于冰上待测。
②组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取0.1 g组织,加入1 mL提取液)处理样品,冰浴匀浆,4℃ 8000 g离心10 min,取上清置于冰上待测。
③血清(浆)、培养液等液体样本:直接检测或适当稀释后再进行检测。
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