胰蛋白酶 纯化原代细胞步骤如下:
1、在去除不需要的组织后,使用无菌的解剖刀和剪子把剩余的组织切成3~4 mm小片,通过悬浮在无钙镁的平衡盐溶液中清洗组织碎片。让组织碎片沉淀,去除上清液。重复清洗2到3次。
2、将盛有组织碎片的容器置于冰上,去除残留的上清液。加入0.25%溶解在无钙镁的平衡盐溶液中的胰蛋白酶(100 mg组织加入1ml 胰蛋白酶)。
3、在4℃孵育6到18小时,使几乎没有胰蛋白酶活性的酶尽可能渗透进去。
4、移弃组织碎片中的胰蛋白酶,在37℃孵育包含残留胰蛋白酶的组织碎片20到30分钟。
5、在组织碎片加入热的完全培养基,用移液管轻轻地分散组织。如果使用无血清培养基,要加入大豆胰蛋白酶抑制剂。
6、通过无菌不锈钢丝网(100~200 mm)过滤,分散所有剩余组织。计数和接种细胞,进行培养。