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小鼠elisa检测试剂盒实验条件选择
在
ELISA
中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括
:
1、
固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是
40
孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
2、
包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好
,
吸附时一般要求
PH
在
9.0
~
9.6
之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响
,
一般多采用
4
℃
18
~
24
小时。蛋白质包被的
zui
适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(
0.1
、
1.0
和
10μg
/
ml
等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的
OD
值。选择
OD
值
zui
大而蛋白量
zui
少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为
1
~
10μg
/
ml
。
3、
酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接
ELISA
法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取
“
方阵法
"
(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
4、
酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求shi价廉、an全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如
OPD
等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如
TMB
和
ABTS
是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以
10-30
分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是
H2O2
在临用前加入
。
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