下面细胞培养操作详述: 1、复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第2天换液并检查细胞密度。 2、细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 1）. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。 2）. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。 3). 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。 4). 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。 3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。