Hepg-2（肝癌细胞）培养

描述：(1)公司可提供新鲜或冻存细胞株；(2)细胞株数量约 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、酵母。
     发货：客户可根���自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右完全培养基；2、说明书及注意事项；3、售后服务标准。
     保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜细胞株，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研。

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
依泽替米贝β-D-葡萄糖苷酸  Ezetimibe β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口 猪热休克蛋白90(HSP-90)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

安普那韦-d4  Amprenavir-d4  质量规格：美国进口 猪生长(GH)ELISA检测试剂盒Porcinegrowthhormone,GHELISAKit 96T/48T

4'-羟基华法林  4'-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口 猪生长抑素(SS)ELISA检测试剂盒PorcineSomatostatin,SSELISAKit 96T/48T

6-羟基华法林  6-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口 猪瘦素(LEP)ELISA检测试剂盒PorcineLeptin,LEPELISAKit 96T/48T

7-羟基华法林  7-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口 猪透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒PorcineHyaluronicacid,HAELISAKit 96T/48T

10-羟基华法林(非对映)  10-Hydroxy Warfarin (Mixture of Diastereomers)  质量规格：美国进口 猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)ELISA检测试剂盒PorcineVascularEndothelial-CadherinComplex,VE-cadELISAKit 96T/48T

3'-羟基华法林  3'-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口 猪血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA检测试剂盒PorcineVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit 96T/48T

8-羟基华法林  8-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口 猪血管**素1(ANG-1)ELISA检测试剂盒PorcineAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 96T/48T

6-苄氧基华法林  6-Benzyloxy Warfarin  质量规格：美国进口 猪血管**素2(ANG-2)ELISA检测试剂盒PorcineAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit 96T/48T

奥美沙坦酸  Olmesartan Acid  质量规格：美国进口 猪血管**素受体Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA检测试剂盒Porcineangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 96T/48T
猪坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒Porcinetumornecrosisfactorα,TNF-α 96T/48T 依泽替米贝酮  Ezetimibe Ketone  质量规格：美国进口

猪可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA检测试剂盒PorcineSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1 96T/48T 3-O-乙酰依泽替米贝  3-O-Acetyl Ezetimibe  质量规格：美国进口

猪皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA检测试剂盒PorcineCoicosterone,CO 96T/48T 依泽替米贝羟基β-D-葡萄糖苷酸   Ezetimibe Hydroxy β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口

猪热休克蛋白90(HSP-90)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 依泽替米贝β-D-葡萄糖苷酸  Ezetimibe β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口

猪生长(GH)ELISA检测试剂盒Porcinegrowthhormone,GH 96T/48T 安普那韦-d4  Amprenavir-d4  质量规格：美国进口

猪生长抑素(SS)ELISA检测试剂盒PorcineSomatostatin,SS 96T/48T 4'-羟基华法林  4'-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口

猪瘦素(LEP)ELISA检测试剂盒PorcineLeptin,LEP 96T/48T 6-羟基华法林  6-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口

猪透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒PorcineHyaluronicacid,HA 96T/48T 7-羟基华法林  7-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口

猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)ELISA检测试剂盒PorcineVascularEndothelial-CadherinComplex,VE-cad 96T/48T 10-羟基华法林(非对映)  10-Hydroxy Warfarin (Mixture of Diastereomers)  质量规格：美国进口

猪血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA检测试剂盒PorcineVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1 96T/48T 3'-羟基华法林  3'-Hydroxy Warfarin  质量规格：美国进口
人尿道组织提取物【Human Ureter: Normal Lliac Artery Derivatives】 规格50rxn/ 10μg/ 200μg

人前列腺组织提取物 【Human Prostate : Normal Prostate Derivatives】 规格50rxn/ 10μg/ 200μg

人肾系膜组织提取物【Human Kidney : Normal Glomerular Mesangial Derivatives】 规格50rxn/ 10μg/ 200μg
注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精（建议配置75%的酒精的水是过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
Hepg-2（肝癌细胞）培养5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

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