A-375：恶性黑色素瘤细胞实验

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分���*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

描述：(1)公司可提供新鲜或冻存细胞株；(2)细胞株数量约 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、酵母。
     发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右完全培养基；2、说明书及注意事项；3、售后服务标准。
     保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜细胞株，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研。

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精（建议配置75%的酒精的水是过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

盐酸美西律（标准品）  Mexiletine   质量规格：含量测定 大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit 96T/48T

美洛西林钠  Mezlocillin   质量规格：>96%,CP,BR 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit 96T/48T

美洛西林钠(标准品)  Mezlocillin   质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticprotein7,BMP-7ELISAKit 96T/48T

米非司酮  Mifepristone  质量规格：>98.5%,BR 大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1AELISAKit 96T/48T

米非司酮（标准品）  Mifepristone  质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-ⅡELISAKit 96T/48T

米氮平  Mirtazapine  质量规格：>99%,BR 大鼠骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA检测试剂盒RatOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit 96T/48T

米氮平(标准品)  Mirtazapine  质量规格：HPLC≥98%,标准品 大鼠骨胶原交联(Cr)ELISA检测试剂盒RatCrosslaps,CrELISAKit 96T/48T

5-氟乳清酸；5-FOA  5-Fluoroorotic acid,5-FOA  质量规格：>99%,BR 大鼠骨桥素(OPN)ELISA检测试剂盒RatOsteopoin,OPNELISAKit 96T/48T

枸橼酸莫沙比利(标准品)  Mosapride   质量规格：≥98%,标准品用于含量测定 大鼠骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISA检测试剂盒RatBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISAKit 96T/48T

枸橼酸莫沙比利  Mosapride   质量规格：≥98.5%,BR,二水合物 大鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA检测试剂盒Ratbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit 96T/48T
大鼠骨保护素配体(OPGL)ELISA检测试剂盒RatOsteoprotegerinLigand,OPGL 96T/48T 盐酸美西律（慢心率）  Mexiletine   质量规格：>98%,BR

大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticprotein2,BMP-2 96T/48T 盐酸美西律（标准品）  Mexiletine   质量规格：含量测定

大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticprotein4,BMP-4 96T/48T 美洛西林钠  Mezlocillin   质量规格：>96%,CP,BR

大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticprotein7,BMP-7 96T/48T 美洛西林钠(标准品)  Mezlocillin   质量规格：HPLC>98%,标准品

大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1A 96T/48T 米非司酮  Mifepristone  质量规格：>98.5%,BR

大鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA检测试剂盒RatBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-Ⅱ 96T/48T 米非司酮（标准品）  Mifepristone  质量规格：HPLC>98%,标准品

大鼠骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA检测试剂盒RatOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGP 96T/48T 米氮平  Mirtazapine  质量规格：>99%,BR

大鼠骨胶原交联(Cr)ELISA检测试剂盒RatCrosslaps,Cr 96T/48T 米氮平(标准品)  Mirtazapine  质量规格：HPLC≥98%,标准品

大鼠骨桥素(OPN)ELISA检测试剂盒RatOsteopoin,OPN 96T/48T 5-氟乳清酸；5-FOA  5-Fluoroorotic acid,5-FOA  质量规格：>99%,BR

大鼠骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISA检测试剂盒RatBone-specificAlkphaseB,ALP-B 96T/48T 枸橼酸莫沙比利(标准品)  Mosapride   质量规格：≥98%,标准品用于含量测定
大鼠心肌组织提取物【Rat Heart: Normal Heart Derivatives】 规格50rxn/ 10μg/ 200μg

大鼠肠静脉组织提取物胞【Rat Intestinal: Normal Intestinal Vein Derivatives】 规格50rxn/ 10μg/ 200μg

大鼠胃粘膜组织提取物【Rat Gastric: Normal Gastric Mucosal Derivatives】 规格50rxn/ 10μg/ 200μg
A-375：恶性黑色素瘤细胞实验细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

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