产酶溶杆菌产酶亚种

菌种的培养：产品仅用于科研

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯**菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的**菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在**上延续使用半年左右。

6、如果有些**菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

微生物菌种的培养：

⒈ 孢子制备

⑴ 放线菌孢子的制备

一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1％，氮源不超过0.5％)，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于放线菌孢子的形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃，少数为37 ℃，培养时间为5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制备

霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25～28 ℃，培养时间为4～14天。

⒉ 种子制备

⑴ 摇瓶种子制备

摇瓶种子进罐，常采用母瓶、子瓶两级培养，有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全，并易被菌体分解利用，氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓，子瓶培养基浓度比母瓶略高，更接近种子罐的培养基配方。

⑵ 种子罐种子制备

种子罐种子制备的工艺过程，因菌种不同而异，一般可分为种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中，经培养后形成大量的菌丝，这样的种子称为种子，把种子转入发酵罐内发酵，称为二级发酵。如果将种子接入体积较大的种子罐内，经过培养形成更多的菌丝，这样制备的种子称为二级种子，将二级种子转入发酵罐内发酵，称为三级发酵。同样道理，使用三级种子的发酵，称为四级发酵。

微生物培养方法：

1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。

2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。

上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：

a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。

b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。

c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。

RatFibrinogen,FbgELISAKit大鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒规格：96T/48T 雷帕霉素/西罗莫司  Rapamycin(Sirolimus)  质量规格：>98.0%,BR,可用于细胞培养

8%蛋白电泳分离预制胶溶液500毫升 雷帕霉素/西罗莫司（标准品）  Rapamycin(Sirolimus)  质量规格：HPLC>98%,标准品

MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISA试剂盒小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA试剂盒规格：96T/48T 甲磺酸雷沙吉兰  Rasagiline Mesylate  质量规格：>98.5%

小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 白藜芦醇  Resveratrol  质量规格：>97.0%,BR

Rat erythropoietin (EPO) ELISA Kit 大鼠红细胞**素(EPO)ELISA试剂盒 白藜芦醇（标准品）  Resveratrol  质量规格：HPLC≥99%，标准品

Humanpeptidoglycan,PGELISAKit 人肽聚糖(PG)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 瑞替加滨碱  Retigabine Base  质量规格：含量>99.0%

Chickeumornecrosisfactorα,TNF-αELISA试剂盒鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒规格：96T/48T 瑞替加滨  Retigabine  质量规格：HPLC>95%,

载玻片细胞TNFBETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 利巴韦林  Ribavirin  质量规格：>99%,BR

MouseEsadiol,E2ELISAKit小鼠雌二醇(E2)ELISA试剂盒规格：96T/48T 利巴韦林（标准品）  Ribavirin  质量规格：HPLC>98%,标准品

小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA试剂盒 ，英文名： GP-BB ELISA Kit 硫酸核糖霉素  Ribostamycin Sulfate  质量规格：≥630µg/mg,BR,可用于细胞培养

T4 RNA Ligase

产品规格：BR，10u/ul

包装：1000U

分子量：43.6kDa，单体

级别：BR

来源：含有T4噬菌体克隆基因63的大肠杆菌

浓度：10u/ul

活性定义：是指在37℃、30分钟内将1nmol 5'-[32P]-(A)12-18转化为磷酸酶抗性形式所需的酶量

酶活性分析混合物：50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 10uM 5'-[32P]-(A)12-18(10uM 5'-末端）

保存液组分：20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5mM ELUGENT变性剂和50%(v/v)甘油

10×反应缓冲液：500mM HEPES-NaOH(PH8.0，25℃), 100mM MgCL2, 100mM DTT

抑制剂：金属螯合剂、SH基团修饰试剂

来源：含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌

浓度：1u/ul(200CEU/ul）

浓度：5Weiss u/ul(1000CEU/ul）

浓度：30Weiss u/ul(6000CEU/ul）

活性定义：是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量（weiss单位，1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量）

酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL(PH7.6), 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]

保存液组分：20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%(v/v)甘油

10×T4 DNA Ligase缓冲液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP(PH7.5,25℃)

抑制剂：当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性

失活：65℃加热10分钟或70℃加热5分钟

注意：T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率，为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下：样本与Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存；转化时，连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%；电转化之前，先用抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase，然后经乙醇沉淀化抽提产物

质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能检测：粘性末端或平末端DNA的连接能力

性状：液体。该酶催化双链DNA或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA的粘性和平末端，但该酶对单链核酸无酶活性。该酶需要辅因子ATP

用途：生化研究

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公司专业代理ATCC菌种，产酶溶杆菌产酶亚种质量保证，为大中型科研提供严格质量体系控制的ATCC,CMCC,CICC,DSMZ标准菌株。

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