(HPIV-2)人副流感病毒2型RT-LAMP试剂盒

产品运输：低温运输

产品保存：常温

产品有效期：一年

产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。公司产品仅用于科研

组成

1 30倍浓缩洗涤液      20ml×1瓶

2 酶标试剂                 6ml×1瓶

3 酶标包被板              12孔×8条

4 样品稀释液              6ml×1瓶

5 显色剂A液               6ml×1瓶  

6 显色剂B液               6ml×1/瓶  

7 终止液                     6ml×1瓶

8 标准品                     0.5ml×1瓶

9 标准品稀释液           1.5ml×1瓶

10 封板膜                   2张

服务流程：

接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照随货说明书中图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

中文名称   方法   规格   prasterone sulfate  中文名：去氢表雄酮硫酸钠盐  分子式：C19H27NaO5S 

中文名称   方法   规格  Phyllostine  中文名：  分子式：C7H6O4 

中文名称   方法   规格  N-Benzoyl-(2R,3S)-3-phenylisoserine  132201-33-3  中文名：  分子式：C16H15NO4  度：98.0%  关键词： 

中文名称   方法   规格  Manidipine di  中文名：盐酸马尼地平  分子式：C35H40Cl2N4O6 

中文名称   方法   规格  Convallatoxin  508-75-8  中文名：铃兰毒苷  分子式：C29H42O10
1,3-Bis(4,5-dihydro-2-oxazolyl)benzene  中文名：1,3-双(4,5-二氢-2-恶唑)苯  分子式：C12H12N2O2    小鼠血栓烷B2(mouse TXB2)     

1,2-O-Isopropylidene-β-D-fructopyranose  中文名：  分子式：C9H16O6    小鼠组织多肽抗原(mouse TPA)  

1,2-Cyclohexanedicarboximide  中文名：  分子式：O2    小鼠血小板**素(mouse TPO)  

1,2-Bis(phenylthio)ethane  中文名：1,2-双(苯硫基)乙烷  分子式：C14H14S2    小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体(mouse AIL/APO 2L)  

1,2-Bis(3-indenyl)ethane  中文名：1,2-双(3-茚基)乙烷  分子式：C20H18    小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(mouse AIL R1)
5950/12/9  Piperlonguminine  25mg  Thallus laminariae昆布LAMP鉴定试剂盒 

5950/12/9  Piperlonguminine  50mg  Thallus laminariae昆布LAMP鉴定试剂盒 

5950/12/9  Piperlonguminine  5mg  Semen raphani莱菔子LAMP鉴定试剂盒 

5960/12/3  Cyclohexanoyl Coenzyme A  10mg  Semen armeniacae amarum苦杏仁LAMP鉴定试剂盒 

5960/12/3  Cyclohexanoyl Coenzyme A  1mg  Flos farfarae款冬花LAMP鉴定试剂盒

实验过程：

一、试剂准备

1. DNA模板

2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步骤

1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2．(HPIV-2)人副流感病毒2型RT-LAMP试剂盒调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。

3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

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