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产品资料

布氏冈比亚锥虫实验步骤

布氏冈比亚锥虫实验步骤
  • 如果您对该产品感兴趣的话,可以
  • 产品名称:布氏冈比亚锥虫实验步骤
  • 产品型号:BJ-R014319
  • 产品展商:邦景
  • 产品文档:无相关文档
简单介绍
布氏冈比亚锥虫实验步骤可以检测组织、细胞、血液等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况。
产品描述

注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研

参数规格:

产品名称

布氏冈比亚锥虫实验步骤

英文名称

Trypanosoma brucei gambiense

货号

BJ-R014319

产品运输:低温运输

产品保存:-20℃保存

产品有效期:一年

产品特点:本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。

产品特点:

◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;

◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;

◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;

◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。


实验过程:

一、试剂准备

1. DNA模板

2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶

二、操作步骤

1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

      引物1(10pM)               2μl

      引物2(10PM)              2μl

      Taq酶(2U/μl)            1μl

      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl

     加ddH2O至               50 μl

     视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。

3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。

使用方法:

注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。

1. 样本处理(样本处理区)

待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。

2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)

取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。

布氏冈比亚锥虫实验步骤组分每头份用量FMD  RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。

1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。

2.加样(样本处理区)

3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。

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