注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研 参数规格：
产品名称
单增李斯特菌prfA基因荧光PCR检测试剂盒
英文名称
详见说明
货号
BJ-R015210
产品运输：低温运输 产品保存：-20℃保存 产品有效期：一年 产品特点： ◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增； ◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝； ◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测； ◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程： 一、试剂准备 1. DNA模板 2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 二、操作步骤 1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。 2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。 3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。 使用方法： 注：所有试剂使用前需完全解冻，混合均匀，6,000rpm离心数秒后使用。 1. 样本处理（样本处理区） 待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等，具体提取方法请参照相关说明书；阳性质控品及阴性质控品无需提取，可直接使用。 2. 扩增试剂准备（PCR前准备区） 取N个（N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品）PCR反应管，每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量，两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。 组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。 1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s，转移至样本处理区。 2.加样（样本处理区） 3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl，盖紧管盖，于6,000rpm离心10s，转移至扩增区。 CTLA4 Ig-24中国仓鼠卵巢细胞 CTLA4 Ig-24 China hamster ovary cells DMEM培养基+10%FBS芦荟苷A质量规格：>85%,BRAloin
NOV Protein Canine 重组狗 CCN3 / NOV 蛋白 (His 标签)芦荟苷(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Aloin
G1(发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠小胶质细胞RM芦荟宁（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Aloenin
心肌细胞培养基CMM-prf芦竹碱质量规格：HPLC≥98%，标准品Gramine
MDK Others Human 人 Midkine / MDK 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 硫唑嘌呤（标准品）质量规格：含量测定Azathioprine 稳定表达EBNA1的人胚肾细胞;293E 人肾皮层上皮细胞完全培养基 100mLIndigo还原靛蓝1毫克CP，98%
人股骨成骨细胞HO-f3,4-1二氧 3,4-qthylqnqdioxythiophqnq 1613-20-1
VP0 Others Human Eerovirus 71 人肠道病毒71型 VP0 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Hacidmonowo7iumsaltH酸单钠盐250毫克BR，99%
黄牛皮肤细胞;BTA-S24-metxoxybenzdehyde对甲氧基25克BR，99%，分子量1800，液体
V79-4细胞，中国仓鼠肺细胞 人直肠腺癌细胞系,HRC-99细胞 CM-R077大鼠血管外膜成纤维细胞完全培养基100mL61-90-5L-亮酸;;;基异己酸L-Leucine;L-2-AMino-4-metxylpentanoic acid;L-α-AMinoisobutylacetic acid;L-α-AMino-γ-metxylvaleric acid 单增李斯特菌prfA基因荧光PCR检测试剂盒CD40LG Others Canine 狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-莰酮，英文名或英文缩写：Camphore，级别：CP，96%，规格：100克
人基质细胞RNAHHGMC miRNA5 μg3,4-二录录苄 1,2-Dichloro-4-(chloromqthyl)bqnzqnq 10-47-6
兔肾细胞;RK-13 白血病细胞，KG-1细胞 MFC-GFP细胞，绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞鳞醋二轻钾 Monobcsic PotcssiuM Phosphctq (cS);PotcssiuM dixy7nogqn phosphctq;MonopotcssiuM phosphctq 78-77-0
人类成纤维细胞系;CNLMG-B5537SKIN维多利亚蓝B，英文名或英文缩写：Basic Blue 26，级别：ACS，规格：5克
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 1783-96-6D-天门冬酸D-Aspartic acid