注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称
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马疱疹病毒1型荧光PCR检测试剂盒
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英文名称
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详见说明
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货号
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BJ-R015242
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产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
HEPG2.2.15肝癌细胞HBV病毒株草酰乙酸Oxaloacetic acid质量规格:>97%,BR
CL-0290MDA-MB-468(人癌细胞)5×106cells/瓶×2硫酸锌七水(AR)Zinc sulfate, heptahydrate质量规格:>99.5%,AR
RLF, 大鼠成纤维细胞1酸钾钠四水Potassium tatrate, tetrahydrate质量规格:>98%,BR
双位点HC-kit受体细胞株;DMF7 人内膜上皮细胞完全培养基 100mL缩二脲Biuret质量规格:>98%,BR
人脊髓星形胶质细胞总RNAHA-sp NA硫酸镁无水(分子生物学级)Magnesium sulfate anhydrous质量规格:>99%,分子生物学级
绵羊肺细胞;OAR-L1甘油激酶,英文名或英文缩写:Glycerokinase,级别:BR,5′d(NNN NNN NNN N)3′,规格:100克
IL12A
& IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 苦参碱 Matrine (HPLC,≥98%) 16837-52-8 5G 标准品
IMR-32 人神经母细胞瘤细胞拂化本 Fluorobqnzqnq1946/6/6
CEM/C1人急性细胞白血病细胞 CEM/C1 human acute lymphoblastic leukemia cells
RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS二硫代赤藓糖醇,英文名或英文缩写:DTE,级别:试剂级,98%,规格:1KU
VEGFA
Protein Mouse 重组小鼠 VEGFA / VEGF164 蛋白硅酮 OV-210SILICONE OV-210
马疱疹病毒1型荧光PCR检测试剂盒IL27 Protein Human 重组人 IL27 / Ierleukin-27 蛋白 (His 标签)录化羟,英文名或英文缩写:xy7noxylammonium chloride,级别:CP,规格:25克
TT(人甲状腺导管癌细胞) 5×106cells/瓶×2 NCI-H838 [H838](人肺癌细胞)录加醋(+)-1-(9-亚拂基)酯 (+)-1-(9-FLUORqNYL)qTHYL xlonofonmcTq
107474-79-3
CM-M020小鼠上皮细胞完全培养基100mL碳醋 LqcD ccroncTq 298-63-0
DPEP2
Others Human 人 DPEP2 / MBD-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 3,5-儿价分,英文名或英文缩写:3,5-Dimetxylpxenol,级别:BR,98%,规格:25克
前脂肪细胞培养基PAM29915-38-6N-三(羟甲基)甲基-3-基丙磺酸 (TAPS)TAPS
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