注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称
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猫细小病毒荧光PCR检测试剂盒
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英文名称
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详见说明
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货号
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BJ-R015246
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产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
NCI-H358(人非小细胞肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 PC-12(肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)富马酸酮替芬质量规格:>99%,BRKetotifen fumarate
CL-0464USMC(大鼠血管平滑肌细胞)5×106cells/瓶×2富马酸酮替芬(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Ketotifen fumarate
CD44
Others Human 人 CD44 人细胞裂解液 (阳性对照) 倍他米质量规格:>98% Betamethasone
人肝内胆管上皮细胞RNAHIBEpiC miRNA5 μg倍他米(标准品)质量规格:HPLC>98% ,标准品Betamethasone
5637(HTB-9)细胞,人膀胱癌细胞 大鼠肝癌细胞(癌细胞接种到肝脏成瘤),Walker-256细胞 MLF, 小鼠成纤维细胞比阿培南质量规格:度>97%Biapenem
人成纤维母细胞-HDF-a2'-(二苄氨基)-6'-(二乙氨基)荧烷(>98.0%(HPLC)(T))质量规格:>98.0%(HPLC)(T)2'-(Dibenzylamino)-6'-(diethylamino)fluoran
CGB5 Others
Human 人 CGB5 人细胞裂解液 (阳性对照) 3',6'-二甲氧基荧烷(>98.0%(HPLC))质量规格:>98.0%(HPLC)3',6'-Dimethoxyfluoran
家兔骨髓间充质干细胞;2012083MSC1,1'-亚甲基二-2-萘酚(>97.0%(GC))质量规格:>97.0%(GC)1,1'-Methylenedi-2-naphthol
二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞;CHO/dhFr- 食管癌细胞,TE-11细胞 B82细胞,鼠细胞系2-萘基苄基(>98.0%(GC))质量规格:>98.0%(GC)Benzyl 2-Naphthyl Ether
B16-F10, 小鼠色素瘤高转移细胞 Mouse5-溴吲哚 质量规格:>99%5-Bromoindole
猫细小病毒荧光PCR检测试剂盒CM-H080人主动脉内皮细胞完全培养基100mLYEASTnitnOGENBASEW/OAMINO&AMM酵母氮源(YNB),不含基酸,不含学级100GRT
小鼠结肠癌细胞;CT26.WT [CT26WT] 小鼠肠上皮细胞完全培养基 100mL灭瘟速S言醋盐 ≥98.0% (HPLC) BLcSTICIDIN S xy7noCHLORIDq3213-3-9
RA, 大鼠星形胶质细胞 RattusAntimony(III)oxide锑白100克AR,98%
ACVR1B
Others Human 人 ALK4 / ACVR1B 人细胞裂解液 (阳性对照) AGAROSEI/TAEBLEND1.0%琼脂糖 - TAE 混合物 1.0%生物技术级100GRT
EB病毒转化的人B细胞;KMY0919(营养琼脂)
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