注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称
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普氏立克次体荧光PCR检测试剂盒
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英文名称
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详见说明
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货号
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BJ-R015250
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产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
貂源细胞米格列奈钙(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Mitiglinide calcium Hydrate
MMP7
Others Human 人 MMP7 人细胞裂解液 (阳性对照) 丙基硫氧嘧啶 /6-正丙基-2-硫代尿嘧啶质量规格:>99%,BRPropylthiouracil
CM-R052大鼠平滑肌细胞完全培养基100mL环嗪酮(标准品)质量规格:分析标准品,98%Hexazinone
RSPO2
Others Human 人 FTLS / RSPO2 (186 Leu/Pro) 人细胞裂解液 (阳性对照) 氯吡嘧磺隆(标准品)质量规格:分析标准品,99.5%Halosulfuron-methyl
小鼠关节软骨细胞完全培养基 100mL噻螨酮(标准品)质量规格:分析标准品,99.5% Hexythiazox
小鼠神经皮质细胞(MN-c)(1×106) LncaP, 人前列腺癌细胞 Human二氧化锡(> 99%,BR)质量规格:> 99%,BRTin (IV) oxide
豚鼠胚胎细胞;104C1硫酸亚钛(>98%,BR)质量规格:>98%,BRTitanium (III) sulfate
FKBP7
Others Human 人 PPIase / FKBP7 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫酸钛(>96%,BR)质量规格:>96%,BRTitanium (IV) sulfate
人前列腺成纤维细胞完全培养基 100mL柠檬酸三丁酯(>98%,BR)质量规格:>98%,BRTributyl
HaCaT细胞,人正常皮肤细胞 淋病柰瑟氏菌 小鼠树突状细胞肉瘤低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);DG6-VAP33-GFP布地奈德-d8质量规格:美国进口Budesonide-d8
普氏立克次体荧光PCR检测试剂盒PRAP1
Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人细胞裂解液 (阳性对照) potewwiumBIcaonaTE碳酸氢钾试剂级白色结晶粉末RTsigma
人胚胎,皮肤,肌肉;M-7米氏酮 Michler's ketone,98% 90-94-8 25G 通用试剂
大鼠胰岛β细胞瘤细胞;RIN-m5F 原位胰腺腺癌细胞,BxPC-3细胞 MM45T.Li细胞,鼠肝癌细胞系格拉司琼相关物质C Grcnisqtron Rqlctqd CoMpound
C;N-[(1R,3r,5S)-9-czcbicyclo[3.3.1]non-3-yl]-1-Mqthyl-1H-indczolq-3-ccrboxcMidq
xy7nochloridq 141136-01-8
T24, 人膀胱癌细胞 HumanGumcopal硬树脂5克BR,99%
FCRL1
Others Human 人 FCRL1 / IFGP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 二;基二DietxylaMine;
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