注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称
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人黏附分子CD44基因PCR荧光PCR检测试剂盒
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英文名称
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详见说明
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货号
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BJ-R015255
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产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
CM-M086小鼠成纤维细胞完全培养基100mL二苯甲酮腙(>98%,BR)质量规格:>98%,BRBenzophenone hydrazone
NBL1
Others Mouse 小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 人细胞裂解液 (阳性对照) 氯化铋(>98%,BR)质量规格:>98%,BRBismuth (III) chloride
小鼠膀胱平滑肌细胞完全培养基 100mL丽春红2R(BS)质量规格:BSPonceau 2R
C127小鼠细胞 C127 mouse mammary tumor cells DMEM培养基+10%FBS孟加拉玫瑰红,酸性红94质量规格:ARRose bengal
IL12B
Protein Marmoset 重组绒猴 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 标签)偶氮荧光桃红,酸性红1质量规格:BSAzophloxine
CD1B Others Human 人 CD1B / CD1A 人细胞裂解液 (阳性对照) 角叉菜胶;卡拉胶质量规格:BRCarrageenan
大鼠肾动脉平滑肌细胞完全培养基 100mL牛磺胆酸-3-硫酸酯二钠盐质量规格:>90%,BRTaurocholate-3-sulfate,di salt
H9c2(2-1)大鼠心肌细胞 H9c2 (2-1) in myocardial cells of rats
DMEM+10%FBS+1%P/SFLAG peptide质量规格:>95%,BRFLAG peptide
IGF1
Protein Human 重组人 IGF1 / IGF-I 蛋白十一1酸锌质量规格:>98%Zinc undecylenate
H4-II-E-C3(大鼠肝癌细胞 ) 5×106cells/瓶×2 小鼠肾小管上皮细胞MREpiC氨甲酰甲胆碱;氯贝胆碱质量规格:>99%,美国进口Carbamyl-β-methylcholine chloride
人黏附分子CD44基因PCR荧光PCR检测试剂盒MV3(人色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2录化钠蔗糖琼脂100毫升
HUAEC
Pellet 人脐动脉内皮细胞团块 > 1 mio.cells 神经细胞培养基NM-prf1-基咪坐;N-基咪坐;1-基甘噁啉 1-MqthyliMidczolq;1-Mqthylglyoxclinq 616-47-7
CL-0381MDA-MB-175VII(人导管癌细胞)5×106cells/瓶×2革兰氏染色液试剂盒(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)1米
LIPF
Others Human 人 Gasic lipase / LIPF 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1.5ml离心管shēng huà shì jì容量:保存:-20℃150u
人心肌细胞-心室总RNAHCF-av NA4792-83-04,4’-偶氮二本4,4'-AZOXYDIpxenETOLE
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