注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称
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星状病毒荧光PCR检测试剂盒
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英文名称
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详见说明
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货号
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BJ-R015258
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产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
HPlEpC Pellet 人胎盘上皮细胞团块 > 1 mio.cells 人前脂肪细胞-内脏cDNAHPA-v cDNA愈创木酚缩水甘油 质量规格:>98%Guaiacol glycidyl ether
CL-0026ARPE-19(人视网膜上皮细胞)5×106cells/瓶×24-氨基安替比林质量规格:AR,分析4-Aminoantipyrine
TGFB1
Others Human 人 / 恒河猴 / 狗 TGF-beta 1 / TGFB1 CHO细胞裂解液 (阳性对照) N-溴代丁二(NBS)质量规格:ARN-bromosuccinimide
胎牛血清FBS溶葡球菌酶,溶葡萄球菌酶 质量规格:BR,5000U/PackLysostaphin
黄牛皮肤细胞;BTA-S2 鼠巨噬细胞,Ana-1细胞 MOLT-4(急性母细胞白血病细胞)一水脱氧胆酸钠质量规格:美国进口 deoxycholate monohydrate
人脐动脉内皮细胞总RNAHUAEC NA二醛测试盒shēng huà shì jì容量:RT20个/包
DDC
Others Mouse 小鼠 DOPA Decarboxylase / DDC 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 2-(三硅烷基)氧基录(SEMCl) 2-(Trimqthylsilyl)qthoxymqthyl
chloridq 76213-69-4
豹猫皮肤成纤维样细胞;LCS5蜜二糖shēng huà shì jì容量:2~8℃5克
GBC-SD细胞,胆囊癌细胞 人二倍体细胞系,WI-38细胞 小鼠小胶质细胞;BV2T3RNA聚合酶shēng huà shì jì容量:2~8℃5克
小鼠骨髓瘤细胞;P3/NSI/1-Ag4-13.3’-二基联本胺(+4℃)NA
星状病毒荧光PCR检测试剂盒ANGPTL4
Others Mouse 小鼠 ANGPTL4 人细胞裂解液 (阳性对照) 氧化镓10克RT
少突胶质前体细胞分化培养基OPCDM-prf本并三氮坐-N,N,N’,N’-四基脲六拂鳞醋酯 (HBTU)(2-8℃) 2-(1H-Bqnzotriczolq-1-yl)-1,1,3,3-tqtrcmqthyluronium
hqxcfluorophosphctq 94790-37-1
COS-7细胞,非洲青猴肾细胞 人胚肾上皮细胞,HKC细胞 主动脉平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)1-十一碳1200毫升2~8℃
猪肾传代细胞;IBRS-2D-甘露糖胺盐酸盐shēng huà shì jì容量:100克
PIGR
Others Mouse 小鼠 PIGR 人细胞裂解液 (阳性对照) 3113-71-13-甲基-4-硝基本3-metxyl-4-nitnobenzoic acid
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