注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研 参数规格:
产品名称
猪痢疾密螺旋体荧光PCR检测试剂盒
英文名称
详见说明
货号
BJ-R015273
产品运输:低温运输 产品保存:-20℃保存 产品有效期:一年 产品特点: ◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增; ◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝; ◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测; ◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 使用方法: 注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。 1. 样本处理(样本处理区) 待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。 2. 扩增试剂准备(PCR前准备区) 取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。 组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。 1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。 2.加样(样本处理区) 3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。 GBA3 Others Human 人 GBA3 / CBGL1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 茶多酚;绿茶提取物质量规格:多酚含量≥98Tea polyphenol
Sars结构蛋白表达株;293sars181A四氢姜黄素 质量规格:HPLC≥98%,BRTetrahydrocurcumin
SW579细胞,人甲状腺癌细胞 人鼻咽癌细胞系,HNE2-LMP1细胞 CL-0363Hs68(人男性正常细胞)5×106cells/瓶×2管花苷A(标准品)质量规格:HPLC≥98,标准品Tubuloside A
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA2’-乙酰基毛蕊花糖苷(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品2'-Acetylacteoside
LAIR2 Others Human 人 LAIR2 / CD306 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸氟桂利嗪质量规格:>99%,BRFlunarizine VERO细胞衍生株;SVPAGAROSEI/TAEBLEND2.0%琼脂糖 - TAE 混合物 2.0%生物技术级100GRT
OS-RC-2细胞,肾癌细胞 小细胞肺癌,SH-77细胞 人肾癌Wilms细胞;G401典化铋钾;典化铋合四典化钾 BisMuth potcssiuM iodidq 41944-01-8
KM小鼠子瘤株;U145'-ATP,Na25-三嶙酸腺苷二钠盐100UBR,98%
ICOSLG Others Mouse 小鼠 B7-H2 / CD275 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-甲基吲哚,英文名或英文缩写:2-metxylindole,级别:BR,48-50℃,规格:100克
人胚胎肺成纤维细胞;WI-38Pectin 25g/100g/500g/1kg原装 Sigma P9135 猪痢疾密螺旋体荧光PCR检测试剂盒SPHK1 Others Human 人 SPHK1 / Sphingosine Kinase 1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) GOLD-N-GELRNADYE,200X12.5mlRT
人表皮色素细胞-胎儿HEM-f溴代三(二甲基基)... Bromotris(dimethylamino)phosphonium He... 50296-37-2 1G 通用试剂
非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2 人癌细胞,MCF-7细胞 SPC-A-1(肺腺癌细胞)L-赖安醋 L-Lysinq 26-87-1
人卵巢畸胎瘤细胞;PA-1胰胨大豆琼脂斜面shēng huà shì jì容量:500毫升
ICAM2 Others Human 人 CD102 / ICAM2 人细胞裂解液 (阳性对照) N-芴甲氧羰酰基-β-NA