注��事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研 参数规格:
产品名称
猪圆环病毒Ⅰ型荧光PCR检测试剂盒
英文名称
详见说明
货号
BJ-R015284
产品运输:低温运输 产品保存:-20℃保存 产品有效期:一年 产品特点: ◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增; ◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝; ◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测; ◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 使用方法: 注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。 1. 样本处理(样本处理区) 待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。 2. 扩增试剂准备(PCR前准备区) 取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。 组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。 1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。 2.加样(样本处理区) 3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。 YAC-1细胞,瘤细胞 人结肠腺癌细胞,HT-29细胞 CM-H021人前列腺平滑肌细胞完全培养基100mL甾醇;(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Ergosterol
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-1甾醇(90%)质量规格:>90%,BRErgosterol
GFRA1 Others Mouse 小鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 蔓荆子黄素(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Vitexicarpin
雪旺氏细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)芒果苷(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Mangiferin
ICAM1 Others Rat 大鼠 ICAM1 / CD54 人细胞裂解液 (阳性对照) 吗替麦考酚酯-d4质量规格:美国进口Mycophenolate Mofetil-d4 ECM1 Others Mouse 小鼠 ECM1 人细胞裂解液 (阳性对照) L-α-基-β-羟基,英文名或英文缩写:L-Threonine,级别:BR,99%,规格:10克
人色素瘤细胞;A875BOC-L-天门冬酸β... Boc-Asp(OBzl)-OH (HPLC,≥99.0) 7536-58-5 5G 通用试剂
IL18RAP Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18RAP 人细胞裂解液 (阳性对照) 流醋亚铁铵;马尔氏盐;低铁矾;亚铁铵矾;流醋低铁铵;六水合流醋亚铁铵;流醋亚铁铵;六水合流醋铁铵;六水合流醋铁(Ⅱ)铵 Fqrrous cluM;Fqrrous cMMoniuM sulfctq;Mohr'sclt 7783-82-9
人肝窦内皮细胞完全培养基 100mL5′-CTP,4Na5-胞嘧啶核苷三嶙酸四钠盐溶液5UUSP级,98%
LLC细胞,小鼠肺癌细胞 CHO(中国仓鼠卵巢细胞) 恒河猴肺细胞;RM-L1姆沙伯 P AW DMCSChromosorb P AW-DMCS 猪圆环病毒Ⅰ型荧光PCR检测试剂盒非洲绿猴肾细胞;BS-C-1NZYMBROTH,POWDERNZYM 肉汤, 粉末生物技术级粉末RT不sigma
IFNGR1 Others Human 人 IFNγR1 / CD119 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-溴炳同醋 BroMopyruvic ccid 1113-29-3
豹猫肌肉成纤维样细胞;LCM4詹纳斯绿 B Janus Green B (certified by the Biolog... 2869-83-2 1G 染色剂
IFNA13 Others Mouse 小鼠 IFNA13 / Ierferon alpha-13 人细胞裂解液 (阳性对照) 威斯塔霉素,英文名或英文缩写:Ribostamycin Sulfate salt,级别:BR,<62.5 μg/ml,规格:1克
JEG-3 人绒毛膜癌细胞(录化)