那么下面上海金鹏分析仪器有限公司为大家简单介绍一下关于核酸印迹:
核酸印迹是一种成熟的技术,用于鉴定先前在凝胶中分离的特定核苷酸序列的存在。(Southern印迹以其**者英**生物学家Edwin Southern命名。在Southern印迹中,分析DNA,在Northern印迹中如果是RNA。在这两种情况下,来自完整凝胶的DNA或RNA都将转移到一块硝酸纤维素膜或尼龙膜上。然后将膜暴露于杂交探针,即具有特定序列的单个DNA片段,要确定其在靶DNA(或RNA)中的存在。对探针DNA进行标记,以便可以通过射线照相,荧光或化学发光法对其进行检测。
印迹是核酸从凝胶到膜的转移,这通常使用毛细管转移方法完成。在此过程中,将凝胶放置在纸芯的顶部,该纸芯浸入包含转移缓冲液的容器中。膜夹在凝胶和一堆吸收性材料(通常是干纸巾)之间,该吸收性材料通过毛细管作用使转移缓冲液通过凝胶。然后,凝胶中的核酸分子被缓冲液携带并固定在膜上。真空吸印是另一种越来越流行的吸印程序,因为它速度更快且回收率很高。真空印迹法还使用缓冲液流将核酸带转移到膜上,但是它使用真空而不是毛细管作用来创建该流。
一旦转移完成,在凝胶上的所有核酸带就被固定(印迹)在膜上,杂交过程可能开始。将膜与一小段DNA或RNA(探针)一起孵育,该DNA或RNA的序列与膜中特定的DNA或RNA序列互补。这允许探针与膜上的特定DNA片段杂交或结合。探针先前已被标记,通常用放射性原子,荧光染料标记或用酶标记,该酶在与合适的底物孵育后会产生化学发光信号。杂交后,标记的探针允许从膜上许多不同的DNA片段中检测目标DNA片段。
以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于核酸印迹。
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