三鹿奶粉事件沸沸扬扬，各地致病患儿的致命成份——三聚氰胺检测方法汇总 GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺
Spectra-Quad实现三聚氰胺含量在线检测
超高效液相色谱_电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺
反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量
高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺
高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氰胺的含量
高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量
固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺
液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚氰胺
液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留
GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺
2.1仪器与条件
Agilent1100高效液相色谱仪(美国，Agilent公司);二极管阵列检测器(DAD)，检测波长240nm，柱温：40℃。
(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);缓冲液：10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。
(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流动相：缓冲液：乙腈=85：15;缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0;流速：1.0mL/min;
离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰尔科技有限公司)
2.2试剂与样品
宠物饲料样品(农业部饲料供应中心);甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司;氨水、乙酸铅、三***、均购于北京化学试剂公司;三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma公司);甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。
3实验方法
3.1样品前处理方法
(1)标准样品配制：
取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以提取液(0.1%三***)稀释至所要的浓度。
(2)提取：
称取饲料样品5g，加入50ml0.1%三***提取液，充分混匀，加入2mL2%乙酸铅溶液，超声20min。
然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)。
(3)净化(PCX小柱，60mg/3mL)：
a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
b)上样：加入提取液3mL
c)淋洗：3mL水;3mL甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。
d)洗脱：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。
e)浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生后GC/MS分析。
3.2HPLC检测方法
3.2.1三聚氰胺HPLC-UV检测方法
三聚氰胺是强极性化合物，在传统的反相C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局(FDA)的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法，采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱，可以得到良好的分离效果，分析色谱图如下：
图2VenusilASB色谱柱分离三聚氰胺的谱图
(a)色谱柱：VenusilASBC84.6×250mm;标准：FDA方法;流动相：缓冲液：乙腈=85：15;缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0;流速：1.0mL/min;柱温：40oC;波长：240nm
(b)色谱柱：VenusilASB-C184.6×250mm;标准：中国农业部颁标准方法;缓冲液：10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min;柱温：40℃;波长：240nm
空白加水平(mg/L)回收率0.01116%0.1108%0.592%296%
3.2.2三聚氰胺LC-MS检测方法
由于FDA公布的HPLC-UV方法中，流动相添加了离子对试剂，因此限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，不能得到较好的分离定量〔3〕。
基于此问题，艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离。因此方法中流动相不含离子对试剂，可以用于质谱检测。
与FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比较，该方法大大降低了低检测限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)，提高了检测灵敏度。
以该方法分别在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的谱图如下：
图3LC-MS方法检测三聚氰胺的谱图
缓冲液：10mM的NH4AC;流动相：Buffer:：ACN=95：5;流速：1.0mL/min;进样量：样品先用70%ACN溶解成约1mg/mL，用ACN稀释成0.1mg/mL，进10uL;柱温：40℃;波长：240nm
4结果与讨论
4.1阳离子交换柱(PCX)
三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般应选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上，具有阳离子交换和反相吸附两种机理，并具有以下优点：
a)可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高检测的灵敏度。
b)批次重复性好。
c)回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
4.2LC-MS方法优点：
(1)检测过程简便：无须添加离子对试剂，三聚氰胺就可得到良好的保留与分离，避免了配制离子对流动相的复杂过程。
(2)提高了检测的灵敏度：无离子对试剂，可以用于质谱检测器，大大降低了低检测限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。
(3)降低了检测成本：不用离子对试剂，就不再需要买价格较贵的离子对试剂了，从而降低了检测成本。
(4)延长了色谱柱的使用寿命：避免了使用离子对试剂减少色谱柱寿命的影响。
(5)该方法所使用的色谱柱具有通用性：无论是用FDA方法、中国农业部部颁标准方法和本公司开发的LC-MS方法，使用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱均能得到一个很好的检测结果，从而给客户了多种选择空间。
国家食品质量监督检测中心有关人士说，在现有的国家标准奶粉检测中，主要进行蛋白质、脂肪、**等检测。三聚氰胺属于化工原料，是不允许添加到食品中的，所以现有标准不会包含相应内容。也就是说，三聚氰胺不属于常规检测项目，正常情况下，很少有人会想到去检测它。
核心关键词：三鹿、食品检测
上海金鹏分析仪器有限公司
电话 www.17bio.com 通过ISO9001：2000认证
以下产品：
核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、紫外分析仪、旋转蒸发器、自动纯水蒸馏器、低温恒温槽
循环水真空泵系列、恒流泵系列、自动部分收集器系列、梯度混合仪系列
层析柱系列、溶剂过滤器系列、动物人工呼吸机系列
电热干燥箱、真空干燥箱、红外干燥箱、烘干器、培养箱、霉菌培养箱、振荡培养箱、生化培养箱、光照培养箱、恒温恒湿箱、隔水培养箱、人工气候箱、厌氧培养箱、二氧化碳培养箱、箱式电炉、管式电炉、电热板封闭电炉、万用电炉、高低温试验箱、盐雾试验箱、老化试验箱、调温调湿箱、植物生长箱、分析天平、精密天平、微量天平、电子天平、天平、架盘天平、静水天平、液体比重天平、电子台秤、水份测定仪、机械天平、扭力天平、酸度计、电导率仪、溶氧仪离子计、滴定仪、卡氏水分测定仪、工业在线分析仪、多参数分析仪、电位仪生物显微镜、学生显微镜、荧光显微镜、金相显微镜、体视显微镜、读数显微镜、倒置显微镜、计量检测显微镜、罗维朋比色计、余氯比色计、色差仪、折光仪、比色计、旋光仪、浊度仪、白度仪、雾度仪、光泽度仪、恒温水箱、恒温水槽、振荡水槽、油浴油槽、电热套、防爆冰箱、低温冰箱、液氮容器、致冷器、精密恒温、槽粉尘计、恒温水浴锅、旋转蒸发器、真空泵、电动搅拌器、恒流泵磁力搅拌器、粉碎机、分散乳化均质机、振荡器梯、度混合器、蠕动泵、超净工作台、除湿机空气自净器、**器、通风柜、可见光分光光度计、紫外可见分光光度计、荧光分光光度计、原子吸收分光光度计、碳硫分析仪、火焰分光度计、气相色谱、液相色谱、质谱仪、色谱相关设备、氢气发生器、氮气发生器、气体发生一体机、空气发生器、层析仪、紫外分析、仪离心机、纯水器、收集器、蒸馏水器、显微(细胞)、、电泳仪、电泳槽、生化分析仪、紫外检测仪、酶标仪、洗板机、PCR仪、基因枪、导入仪、超声波细胞粉碎仪、超声波清洗机