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（化学试剂） 人Traf2结合蛋白(T2BP)酶联免疫分析试剂盒
日期：2024-12-25 14:11
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摘要：
（化学试剂） 人Traf2结合蛋白(T2BP)酶联免疫分析试剂盒
人Traf2结合蛋白(T2BP)酶联免疫分析试剂盒说明书
人Traf2结合蛋白(T2BP)酶联免疫分析试剂盒说明书
人Traf2结合蛋白(T2BP)酶联免疫分析试剂盒仅供研究使用
预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中T2BP含量。
说明:
1.试剂盒保存：-20℃(较长时间不用时)；2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理:
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗T2BP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗T2BP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的T2BP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
人Traf2结合蛋白(T2BP)酶联免疫分析试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板(Assay plate )：一块(96孔)。
2.标准品(Standard)：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody)：1×120ul/瓶(1：100)
7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)：1×120ul/瓶(1：100)
8.底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材:
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和Eppendof管
5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，*好用多通道移液器
6.蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存:
1.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。*后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释2000 pg/ml，1000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62 pg/ml，31 pg/ml，15.6 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制1000 pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)2000 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul生物素标记抗体加990ul生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根过氧化物酶标记亲和素加990ul辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤:实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100ul(取1ul生物素标记抗体加99ul生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100ul，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：
1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是*后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法:
1.自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
2.手工洗板方法：吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
计算:以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项:
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间*好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，*好做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请*后乘以稀释倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人T2BP，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月
订货信息： （化学试剂） 人Traf2结合蛋白(T2BP)酶联免疫分析试剂盒
联系人：陈经理
联系电话：021-33779006,33779008,65538622,********
传真：021-65538480
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