MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱固定相是粒径为3μm、孔径为100Å的硅胶涂敷在新型光学活性体N,N-Dioctyl-L(D)-alanime表面,MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱流动相为硫酸铜水溶液。
MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱的区别如下:CRS10W色谱柱中, D构型化合物先于L构型被洗脱出来, CRS15W色谱柱中,L构型化合物先于D构型化合物被洗脱出来。
MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱不但能分离α-氨基酸,也能分离α-羟基羧酸。
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MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱使用注意事项:
1、配体固定相和铜离子流动相之间达到平衡需要几个小时。在进样之前或者改变硫酸铜洗脱液的浓度时,建议平衡柱子2-3小时。
2、对于酸性氨基酸,高浓度的硫酸铜洗脱液可以得到更好的分离效果。
3、对弱保留的亲水性氨基酸,降低流速(0.2-0.5ml/min)可增加保留。
4、当样品溶液中氨基酸的浓度高于流动相中硫酸铜的浓度时,连续进样可能会降低峰面积。
5、注意不要同时使用水溶性有机溶剂(乙腈、甲醇等)和非水溶性有机溶剂(正己烷、氯仿等)做流动相,这会对柱子造成不可修复的损伤。要特别注意该柱正反相模式不可更换。
6、不要使用酸或碱溶液调节流动相的pH值。不要使用缓冲液,因为缓冲液会形成沉淀,堵塞柱子。
7、对于强保留的亲水性氨基酸,流动相中添加乙腈或者甲醇可以快速洗脱。有机溶剂的浓度要低于15v/v%。
8、DOPA和其它非极性氨基酸会吸附到柱填料上,污染柱子。
9、污染后的柱子再生很困难。
Examples of chromatographic conditions and data
Amino acids
CuSO4 aq.soln(mM)
Flow rate(ml/min)
Retention time L-Isomers(min)
Separation factor(α)
Separation rate(Rs)
1
OmHCl
0.1
0.2
6.8
1.26
<1
2
LysHCl
7.7
1.45
3
Ala
0.5
11.0
1.39
1.4
4
HlsHCl
10.5
1.63
1.7
5
Ser
10.1
1.25
1.0
6
Thr
11.3
1.29
1.3
7
Cit
10.4
1.75
2.3
8
Hyp
23.8
1.23
1.1
9
Pro
7.3
2.13
4.5
10
Val
8.9
2.04
5.0
11
Nval
11.5
2.07
4.7
12
Asp
2.0
13.2
1.18
0.8
13
Glu
16.2
1.54
14
Ileu(DL)
30.4
2.14
6.5
15
Ileu(allo)
21.9
1.97
6.0
16
Leu
14.6
4.6
17
Nleu
24.1
2.16
18
Met
10.3
1.64
2.6
19
Tyr
22.5
1.85
5.3
20
Eth
26.4
1.69
21
Phe
37.8
1.84
6.3
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