Westernblot检测化学发光成像系统的特点:Westernblot是蛋白质研究中常用的一个手段,大部分westernblot显色底物是化学发光底物,后的显示方法有胶片(压片)法和化学发光(荧光)成像系统。
胶片法需要暗房,X光胶片,配置显影液、定影液,然后进行压片、显影、定影,要得到一个比较理想的图片,往往需要重复压片几次,操作非常繁琐,而且需要耗材。
化学发光(荧光)成像系统则超越了胶片法,不需要暗房、压片,关键的条带不会因为曝光不足或者曝光过度而丢失,而且该方法无耗材,图片结果为电子文档,方便存档和长期保存。
所以,化学发光(荧光)成像系统是每个涉及生命科学研究的实验室必备的仪器,何况大部分化学发光(荧光)成像系统还兼顾了凝胶成像系统的功能,但是,化学发光(荧光)成像系统在的普及率并不高,究其原因还是价格和性能:进口产品性能虽好,但价格比较贵,很多实验室买不起;目前有少量的国产,虽价格便宜一些,但性能不好。
国产性能不好的主要原因在于CCD相机,因为对CCD要求不高的凝胶成像系统,国产已占居大部分市场,而化学发光(荧光)成像系统对CCD要求极高:高灵敏度、高动态范围、低噪音。
符合这些条件的进口冷CCD相机价格也很贵,国产化学发光(荧光)成像系统如用这种相机,性能有了保证,但失去价格优势;如用国产冷CCD相机,由于所用芯片不合适(为降低成本,未选用高灵敏度芯片),或者AD转换为12bit(动态范围太低),或者在设计上未注意降噪的细节等原因,性能达不到化学发光(荧光)成像系统要求。
化学发光(荧光)成像系统专用冷CCD相机系列,与普通凝胶成像系统相比,其特点体现在:
1)高灵敏度CCD芯片:采用化学发光成像系统通用的高灵敏度CCD芯片。
2)高动态范围:CCD芯片选定后,相机的动态范围就由AD转换器决定,国际知名的化学发光成像系统均采用了16bitAD转换,而12bit的相机用于凝胶成像没问题,用于化学发光就不合适了。
3)低噪音:相机产生的噪音有二种,分别是热噪音和读出噪音,在降低热噪音方面,通过多级半导体制冷,使CCD芯片温度低于环境温度50°C左右,且温度可控,控温精度为±0.2°C,并可控制半导体制冷开关和风扇开关;在降低读出噪音方面,通常采用低噪音的16位A/D转换,同时反复优化电路设计,降低噪音。
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