分光光度计测定溶液的吸光值和吸光度 蛋白质纯化实验中，将会测定 b-glucuronidase （GUS）的活性，是利用 p-nitrophenylb-D-glucuronide 为基质，加入酵素反应后所释出之 p-nitrophenol 在碱性下呈现黄色，可测定 415nm 之吸光度，利用 Beers Law即可计算求得反应物之生成量。本实验将利用已知浓度之 p-nitrophenol,测定其 A415,以求取p-nitrophenol 在 GUS 活性测定条件下之 消光系数 （extinctioncoefficient）。
药品试剂：
p-Nitrophenol10×GUS assay buffer （0.5M Na phosphate, pH 7.0; 1% Triton X-100; 0.1 Mβ-mercaptoethanol）GUS 终止液 （2.5 M 2-amino 2-methylpropanediol, 溶于水中， pH11）
方法步骤：
1） 配制5 mM p-nitrophenol stock solution: 秤取_____ mg p-nitrophenol,置于400 mL 烧杯中，加入25 mL 10×GUS assay buffer,加水至约200 mL,搅拌溶解后，加水至250 mL 并混合均匀。请配制三份。
2） 配制50 μMp-nitrophenol 溶液：分别由三份stocksolution 取适量以1×GUSassay buffer稀释之。
3） 取1 mL 50 μMp-nitrophenol溶液于试管中，加入0.4 mL 2.5 M2-amino2-methyl propanediol溶液，混合均匀后测定A415. 另取1 mL 1×GUS assaybuffer,加入0.4 mL 2.5 M 2-amino 2-methyl propanediol溶液，混合均匀，亦测定A415,以作为blank.
4） 由Beer's Law 求出p-nitrophenol 在此测定条件下之消光系数。
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