1．判断仪器脱气机是否正常：打开purge阀，流速设为2ml/min，然后提起过滤头，让体系进一些空气，再放下过滤头，看气泡是否会减少来判断脱气机是否起作用； 2．溶剂过滤头不可超声清洗，可用35%硝酸浸泡1小时后再用溶剂清洗； 3．EDTA、乙二胺四乙酸等会对液相柱的不朽钢产生腐蚀；四氯化碳与2-异丙醇、四氢呋喃不可混合使用，但可单独使用； 4．溶剂的使用：每两天更换或重新过滤溶剂(尤其是水，需要每天更换)；流动相过滤是为了去除微生物，一般水要放在棕色瓶中； 5．判断purge阀的滤芯是否需更换：用水作流动相时，流速为5ml/min时，正常泵压应为0bar(若打开purge阀时，泵压超过10bar时需更换滤芯)； 6．若用非极性溶剂作流动相，则需更换泵中起密封作用的“黑草帽”(适合反相的材料为石墨+聚四氟乙烯，而适合正相的为 )，而且必须一对同时更换，否则损坏更快； 7．密封垫的冲洗：当流动相中盐的浓度大于0.01M时，可减少密封垫的磨损；用1%异丙醇溶液冲洗活塞杆中析出的盐(加异丙醇是为了防止**生长)，流速设为3-5滴/min；泵开着，洗盐装置也须开着； 8．泵头不可用超声清洗(可用乙醇、水清洗)、宝石杆不可超声，石英窗可用超声清洗； 9．缓冲盐的通道放在比例阀的下面，只有两相的话，只用一边(盐在下面，有机相在上面)； 10．双元泵为泵后混合方式(为高压混合方式，不易进气泡)，而四元泵为低压混合方式； 11．出口球型阀(outlet ball valve)可用超声清洗； 12．双元泵有一个筛网(sieve)可控制低流速； 13．流动相使用了缓冲盐，则必为反相柱(不可长时间用水冲)，一般可冲20-30min，然后加入有机相(如甲醇)，浓度逐步加大，直至甲醇； 14．反相和正相转换时，一般要做溶剂过渡(佳为异丙醇)，因为粘度大，流速不可设太大，不要超过1ml/min(完全置换原来溶剂所需溶剂体积=体系体积(柱体积+1.5ml)×5)； 15．比例阀内漏：抬起有嫌疑的通路，看管内流动相体积是否减少(抬起时同时打开purge阀)； 16．泵压力不正常可能原因：气泡、主动阀故障、出口阀故障、密封垫或柱塞杆磨损，渗漏或堵塞、比例阀故障、传感器故障、使用比例阀混合时盐浓度太高； 17．自动进样：旁路状态、主路状态；手动进样：load状态至inject状态(好满刻度进样，建议吸3倍以上进样体积)，小体积进样则以小于1/2进样阀体积为佳；平时进样阀好保持在inject状态(右边状态)； 18．进样流程：插针——inject状态——load状态——进样(缓慢)——inject状态——拔出针(进样阀后有两根废液管)； 19．VWD(可变波长)检测器：检测器后out废液管不可太短，否则流通池容易进气泡，也不可太长，否则易压碎流通池； 20．DAD检测器(优势为优化条件方便)：**长选择——要选择溶剂没有吸收的位置(避开约20nm)；VWD检测器的灵敏度略高于DAD检测器；滤光片中钬玻璃用于校准波长；若要检测器的灵敏度提高则要开大狭缝(二极管阵列前狭缝默认为4nm)； 21．DAD检测器的氘灯可用于VWD检测器，但反之则不行；钨灯、氙灯寿命长，可随开随用，但“氘灯需要预热(10几分钟)(寿命为1000小时)，1-2小时不用，不用关，还是开着更好，氘灯放时间长容易衰变”，灯可进行测试； 22．测定条件设定：reference wave(流动相中溶剂的吸收)可以不设，梯度洗脱时参考波长要设，否则会导致基线漂移，DAD可选一个样品没吸收的波长作为参考光；band width(VWD设为光谱的半谱带宽度，而DAD检测器则不用设)(此范围内作色谱图可降低噪音，信噪比更好，但信号会降低)；参考波长选择原则：样品没有吸收，但靠近样品大吸收的位置；参考光波长带宽必须大于或等于测量光波长带宽；DAD选条件时要存所有光谱图(spectrum)；氘灯(190-800nm)，但有效范围为190-600nm，钨灯(470-950nm)，若用470-800nm时两灯同开则强度加大； 23．基线噪音大原因：泵压不稳、有气泡、柱污染； 24．清洗在线脱气机及比例阀(尤其是长期使用水相或缓冲盐的通路)：先用水冲洗，再用甲醇冲洗，可以打开purge阀，使用5ml/min的流速，也可用IPA清洗：A、Buffer B、MeoH C、Water D、CH3CN 分析：A:B:D=20: 25．流动相大于9.5或小于2.3时，进样阀应更换tefzel转子密封，可耐受压：VWD(40bar)，MWD(120bar), FLD(20bar), RID(56bar)；RID,FLD永远是后一个检测器；
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