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3M测试片

1.操作方法

①未开封时，置于≤8℃冷藏，注意外包装上的保存期限，打开包装时，应在室温条件下。已开封的，应用压条或胶带封口后，置于室温，一个月内用完。

②称取样品置于无菌均质袋或均质杯中，加入无菌稀释液搅拌或均质样品，并用稀盐酸或稀氢氧化钠调pH至6.5~7.2。

注意：无菌稀释液不可使用含有柠檬酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液，这些稀释液会抑制**的生长。

③将测试片置于平坦表面处，保持水平，揭开上层膜，移液器或滴管吸1ml样液垂直滴加在测试片的正中央。然后将上层膜慢慢落下，尽量不要出现气泡，切勿向下滚动上层膜。

④将压板的圆形内凹面朝下，放置在上层膜的正中央，然后轻轻压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养基面积上，切不可扭转压板。

⑤拿起压板，静置1min以上等待培养基凝固。然后测试片的透明面朝上，*多可叠放20片，置于36℃培养48小时，并保持培养箱的湿度。

2.判读3M测试片方法

①菌落总数测试片内，含有一种红色指示染剂，可以使菌落呈现红色便于计数，计算所有红色菌落，不论大小及颜色深浅。

②3M检测片菌落计数的适宜计数范围是25~250。

③测试片的计数面积约为20cm2。每一个黄色方框的面积是1cm2。当菌落总数超过250个时，为了估计菌落数，可以选择其中一个或几个有代表性的小方框（1cm2）。计算平均菌落数，然后再乘以20可得到测试片上的菌落数。

④当测试片上的菌落太多而无法进行计数时，记录为“TNTC”。

⑤有很高数量的菌落，使整个生长区域变成粉色，或仅仅在生长边缘区域观察到单个菌落，记录为“TNTC”。

⑥有很高的菌落数量，并且有时菌落会出现分布不均匀的情况，记录为“TNTC”。

⑦可以看到直径较大的菌落，并且可以计数，但是仔细观察时，会发现非常密集非常细小的菌落分布在计数区域内，此时记录为“TNTC”。

⑧很少数量的菌种，会将测试片上的培养基液化，在计数区域内出现一个粉红色的液化区，此时不要记录液化区内的红点，应选择没有被液化区域内的菌落进行计数，选取没有液化部分的几个有代表性的小方格（1cm2）。计算平均菌落数，然后乘以20。得到结果。

⑨注意和样品残渣颗粒进行区。有些样品中会含有一些红色的残渣颗粒，菌落应该是红色规则的圆形，而颗粒的形状是不规则的。如果样品以红色颗粒为主（比如辣椒粉），这类样品的菌落总数检测，不宜采用3M菌落总数测试片。

3M大肠杆菌/大肠菌群测试片

1.操作方法

操作方法与3M菌落总数测试片基本相同，只是不需要压板，直接把1ml样液加到中间红色圆形区域内，然后将上层膜轻轻放下，尽量不要产生气泡。然后可以轻轻的转动一下纸片，使样液可以均匀地分布在中间红色的圆形区域内。

2.判读方法

大肠菌群在纸片上呈现红色菌落，紧贴着菌落有气泡，大肠杆菌在纸片上呈蓝色菌落紧贴菌落有气泡。此时应注意区分只有红色或蓝色菌落而没有气泡的情况，或者气泡不是紧贴着菌落，或者只有气泡无菌落生长，都不应列入计数范围。此外还应区别样品残渣和目标菌落。

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