利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液,在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例,实际上还可以应用于各种型号各种容量的固定角式转头。
(一) 梯度液
A液:11.40gNacl,0.1g EDTA-Na2,置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1
ml 1NNaOH,混匀至全部溶解。加重蒸水至1000ml后再加3ml重蒸水(Nacl:0.195mol)。终密度1.006g/cm3,PH10.37。
B液:加24.98g NaBr 到100mlA液中。终密度1.182g/cm3。(Nacl:0.195mol,NaBr:7.65mol),PH9.72。
C液:加78.32g NaBr 到100mlA液中。终密度1.478g/cm3。(Nacl:0.195mol,NaBr:7.65mol),PH8.86。
(二) 离心机及转头
• 离心机:Hitachi CP-MX系列超速离心机或其他类似机组。
Hitachi CS-150GXL微量超速离心机。
• 转头,离心管;S 140AT:140,000rpm,1,050,000×g,10×2ml,K=5,1PC厚壁管。
S 80 AT3:80,000rpm,415,000×g,8×8ml,K=23,6PC厚壁管。
S 70 AT:70,000rpm,505,000×g,8×40ml,K=44,40PA管。
(三) 血浆-血球分离:
全血,角转头或甩平转头3000rpm×20min,沉淀为血细胞,上清血浆待用。
(四) 乳糜粒分离:
•离心参数:各种转头均可用,4×106(g×min),10℃
• 梯度液:离心管下部3/4容积为血浆,上部1/4容积为0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。
•离心结果:乳糜粒上浮,离心管倾斜,吸管贴管壁慢吸出(约占血浆容积的2~6%。禁令12小时以上供血者血浆中乳糜含量很低,食后供血者含量较高。
(五) 血清脂蛋白分离:
(ⅰ)VLDL分离(ρ<1.006g/cm3)
转头 | 离心管内液体分布 | 离心参数 | 结果 |
S140AT (CS-150GXL机组) | 下部600μl血浆 上部300μl A液 | 140,000rpm×50min 16℃ 加速:5 减速:7 | 可见明显分层上部约1/3VLDL吸出 |
S80AT3 (CS-150GXL机组) | 下部3.4ml血浆 上部1.7mlA液 | 80,000rpm×4.5hrs 16℃ 加速:5 减速:7 | 同上 |
P70AT (CP-MX机组) | 下部24ml血浆 上部11.7ml A液 | 70,000rpm×8hrs 16℃ 加速:5 减速:7 | 同上 |
(ⅱ)LDL(含IDL)分离(1.006g/cm3<ρ<1.063g/cm3)
转头 | 离心管内液体分布 | 离心参数 | 结果 |
S140AT (CS-150GXL机组) | 次离心后上部VLDL取出,下部600μl移入另一离心管,加入300μl B液,充分混合 | 140,000rpm×80min 16℃ 加速:9 减速:7 | 上部1/3体积LDL+IDL吸出 |
S80AT3 (CS-150GXL) | 次离心后上部VLDL吸出,,下部3.4ml移入另一离心管,加入1.7ml B液并充分混合 | 80,000rpm×5.5hrs 16℃ 加速:9减速:7 | 同上 |
P70AT (CP-MX系列超速机或类似机型) | 次离心后上部11.7ml吸出,下部约24ml 移入另一离心管,加入11.7ml B液,充分混合 | 70,000rpm×10hrs 16℃ 加速:9 减速:6 | 同上 |
(ⅲ)HDL分离(1.063g/cm3<ρ<1.21g/cm3)
转头 | 离心管内液体分布 | 离心参数 | 结果 |
S140AT (CS-150GXL机组) | **次离心后吸出上部300μl后,下部600μl移入另一离心管,加入300μl C液,充分混合 | 140,000rpm×140min 16℃ 加速:9 减速:7 | 可见较明显分层, 上部为HDL,下部为血清白蛋白及球蛋白 |
S80AT3 (CS-150GXL机组) | **次离心后吸出上部约1.7ml、下部3.4ml移入另一离心管,加入1.7ml C液,充分混合 | 80,000rpm×8小时 16℃ 加速:9 减速:7 | 同上 |
P70AT (CP-MX系列机或其他类型机组) | **次离心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一离心管,加入约12ml C液,充分混合 | 70,000rpm×15小时 16℃ 加速:9 减速:6 | 同上 |