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层析柱中固定相如何选择

高效液相层析法

高效液相层析法是用特制微粒（<10um）充填的层析柱作为固定相，通过高压使液体流动相快速通过层析柱而达到快速有效分离液相中各种物质的层析技术。它具有分离效果好、分析速度快，检测灵敏度高等特点。在医药卫生和生物化学中得到广泛的应用，蛋白质、糖类、核酸、氨基酸、生物碱、类固醇和类脂等大分子以及高分子聚合物都能用HPLC测定。

典型的高效液相色谱仪包括输液系统、进样分离系统、检测系统和数据处理系统等部分组成。流动相用一高压泵输入，由于流动相液体中常溶有微量气体，脱去其中气体是很有必要的。在分离过程中按一定程序连续改变流动相的离子强度、pH和极性，以改变分离条件、提高分离效果、缩短分离时间，因此，需要两台高压泵。进样可以是注射器进样，也可以是进样阀进样。HPLC使用的检测器不少，但商品化的还不多，应用多的是紫外或紫外－可见分光检测器，还有荧光检测器、示差检测器和电化学检测器等。

（一）层析柱方法原理

1．液固吸附层析法在色谱柱中填充固体吸附剂，待测组分通过色谱柱时，不断地被吸附剂吸附和被流动相解吸附。基于不同组分非被吸附和被解吸附的行为差异，从而达到分离的目的。常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、弗罗里硅土等。

2．液液分配层析法系在固体填充颗粒上涂上一层薄薄的固定液，待测组分在固定相和流动相之间进行连续的分配萃取，由于被分离物质在两相间的分配系数不同而达到分离目的。

3．离子交换层析法在色谱柱中填充离子交换树脂。带电离子随流动相经色谱柱时，与带有异性电荷的树脂有一定的亲和力而得以适当保留。由于各种离子与树脂的亲和力不同，其保留行为也不同，从而得以分离。

（二）层析柱临床应用

高效液相层析法是目前好的血药浓度监测方法，但在实际应用中还存在一些问题，如每遇到一个新药必须摸索测定的佳条件；各种**的测定条件不同，要不断的更换流动相甚至色谱柱；每次只能测定一种**，至多只能测定一类**，无法测定性质不同的**。因此，高效液相层析法用于常规血药浓度监测，只适用于少量常用的某些特定**，大大限制了它的推广应用。鉴于临床的需要，国外一些公司设计了自动高效液相色谱仪，该仪器具有如下优点：①固定色谱柱和流动相，使一台仪器适合多种**的检测。②利用计算机技术，储存几百种**的图谱，能自动识别未知**。③为提高图谱鉴别能力，该机利用了三维光谱、出峰时间等多种手段。④自动进样系统使仪器自动定量或定性测定，分析多达50个样品。

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