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透射荧光显微镜与反射荧光显微镜的比较
透射荧光显微镜
光源:高压汞灯或卤素灯。
聚光镜:使用暗场聚光镜,使激发光和荧光分离出来。
物镜:可用任何种类的物镜。
标本:因为是透射观察,薄的标本比较适合。
优点:
①
由于用了暗场聚光镜,激发光不能进入物镜,因此容易形成暗的背景,得到良好的反差,且任何物镜都可用于观察。
②
用低倍物镜时,比反射荧光显微镜更亮。
缺点:必须正确调整聚光镜中心和高度,否则不能获得明亮的荧光像。由于暗视场聚光镜焦距限制,不能使用厚的载玻片。视场照明区不能过大,否则容易使荧光标本荧光色衰褪。厚的或不透明的标本不适用。
反射荧光显微镜
光源:高压汞灯或卤素灯。
聚光镜:因为物镜作为聚光镜,所以不需要聚光镜。
物镜:所用物镜必须能透过足够的紫外光,而且本身不产生荧光,对数值孔径没有限制。
标本:厚的标本或不透明的标本都能观察。
优点:
①
由于物镜兼作聚光镜,不需要很多调节。
②
采用柯拉照明法,可利用孔径光阑和视场光阑的效果。
③
物镜数值孔径不受限制,在高放大倍率时,也可以获得高分辨率的像。
④
厚的或不透明的标本也能观察,厚的盖玻片也能使用。
⑤
其它观察法也能与反射荧光结合使用,特别和相差法和透射微分干涉差法相结合。
⑥
可以避免不必要的荧光色衰褪现象。
缺点:在用地倍率物镜时,像比较暗,因此必须用大数值孔径的物镜。滤光镜系统必须有效地分离开激发光和荧光。
上海金鹏分析仪器有限公司
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