核酸蛋白检测仪层析分离技术是我国高校《生化分析实验》中的基础实验。70年代后期研制的“核酸蛋白检测仪”,使用某一波长(280nm或254nm等)进行定性检测分离,用记录仪描谱,长期在高校实验室使用。在我国科技人员努力下,近年来,市场上相继出现了可代替记录仪的“电脑采集器”、“电脑核酸蛋白检测仪”、“双波长电脑核酸蛋白检测仪”、“层析-电导联用系统”等产品,迅速应用到教学实验、科学研究和**生产领域。
一、检测原理
所有紫外吸收检测器工作原理都是基于光的吸收定律---朗伯-比耳定律。该定律指出,当一束单色光(λ)辐射通过稀浓度物质溶液时,如果溶剂不吸收光,则液体的吸光度与吸光物质的浓度和光经过溶液的距离成正比。其关系式为:
A(λ)=a(λ)bc
A=-LgT=Lg1/T
二、核酸蛋白检测仪层析装置分类:
按描谱方式分有:记录仪描谱和电脑描谱(外加采集分析器)
按检测波长分有:单波长检测和双波长(多波长)同步检测
按检验器分有:核酸蛋白检测和核酸蛋白检测、电导检测联用
三.传统检测仪:
传统层析实验装置由单波长核酸蛋白检测仪(外加电脑采集器或将电脑采集器装入检测仪中也属此类)、层析柱、恒流泵、部分收集器和记录仪等部件构成。数显超声波测厚仪用一种波长(如280nm或254nm等)下对已知物质(蛋白或核酸等)进行实验检测,高校实验室的层析实验装置大多属于此类。特点如下:
1、检测前必须选定一种波长(280nm、254nm)进行检测,利用物质特征波长分离已知组分。
2、要求学生在检测前一定要先调整透过率为,然后再调整吸光度为0。学生经常会问:虽然透过率和吸光度在此点(T=,A=0)符合了A=lg(1/T)关系,但怎样保证在测量范围内都符合朗伯--比尔定律?
3、传统检测仪为保证测量读数落在仪器有效测量范围内,在仪器面板上都设有灵敏度选择装置(2.0A、1.0A、0.5A、0.2A、0.1A、0.05A等)。因此,测量前要选择合适的灵敏度;②真正吸光度值是仪器显示数与灵敏度的乘积;③测量中不要改变灵敏度,数显超声波测厚仪否则可能会带来基线变化。
4、传统检测仪在不同灵敏下的测量结果均为0-10mv直流信号,将此信号输出到记录仪或电脑采集器。显然,记录纸或电脑屏上的吸光度也并非样品实际的吸光度,也应受到仪器灵敏度的调制。
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