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PCR的优越性与局限性

聚合酶链反应即PCR技术，因为其对基因或特定核酸序列在短时间内的极大的扩增效率，已在感染性**、肿瘤、遗传病、寄生虫病、法医学、动植物和考古等的诊断和研究中得到了广泛的应用，并在某些方面几乎是难以替代的。但是，像自然界的任何事物一样，PCR也有其局限性，稍不注意，就很容易造成错误的判断。

　　感染性**由病原微生物引起，主要有病毒、**、衣原体、支原体和螺旋体等，在PCR出现以前，这些病原体通常采用培养、**学方法测定特异抗原抗体，核酸杂交等进行临床检测，但这些方法对某些病原体要么难以进行（如导致结核病的结核杆菌、引起性病的沙眼衣原体和诱发肝炎的乙肝丙肝病毒等的培养），要么难以判断体内的复制情况或检测的灵敏度不够（如乙肝丙肝病毒和人**缺陷病毒等的抗原抗体检测及核酸杂交检测等）。PCR的出现，可以说从根本上改变了这一点，其极高的检测灵敏度和特异性，使难培养病原体的检测变得迅捷而又准确。各种定量PCR模式的出现，又使其抗病毒疗效的判断可以很客观地从病毒核酸的量上反映出来。并且，PCR用于病原体感染的血液筛查，可以检出抗原抗体尚未出现的“窗口期”内的感染，从而避免经输血引发的感染性**的传播。

　　遗传基因的异常可致遗传病的发生，人类遗传病约有3000多种，患者占总人口数的10％。遗传病一般可分为单基因、多基因及染色体遗传病。这些遗传病通常是由于基因突变、基因缺失、染色体错位所致。以前常用的诊断方法有家系谱分析、染色体检查（特别是显带法）、生物化分析等。现PCR技术由于其对基因体外扩增快速灵敏的特点，结合其他多种分子生物学手段可以检出大部分已知的基因突变、基因缺失、染色体错位等，应可成为遗传病诊断的*有效、*可靠的方法之一。

　　法医学也因为PCR技术的出现，进入到了分子物证的时代，并可以**到个体确认水平，其在分子水平上对血斑、精斑、毛发、组织碎片乃至微量残留细胞等法医物证的确认，远较以前的血清学方法确实可靠，如以前的血型鉴定，只能是排除不同血型者，而无法做到个体确认。并且PCR因为其极大的扩增效率，可以对极少量物证，如一根毛发、一滴血液、极小精斑、体液中的脱落细胞等进行分析，从而确定个体。可以说，当代法医鉴定在个体鉴别上已离不开PCR技术。

　　众所周知，肿瘤与遗传有关，除已知的单基因遗传肿瘤，如视网膜细胞瘤、肾母细胞瘤等以外，几乎所有的肿瘤细胞中都可以观察到原癌基因的重排，这些基因的变化常导致细胞增殖与凋亡失控，*终形成肿瘤。PCR扩增检测技术，使癌基因和抑癌基因及其状态的检测，变得简便、快捷而又容易。此外，使用反转录PCR检测特定肿瘤抗原的mRNA，很容易监测到癌转移的发生。

　　PCR这种基因扩增技术因其简单易行，应用现已极为广泛，但其影响因素很多，如标本或核酸纯化过程中出现的扩增反应抑制物、扩增仪孔间温度的差异以及核酸提取中的随机误差，可造成假阴性结果的出现。又如，以前扩增产物的污染和核酸提取中标本间的交叉污染，也很容易出现假阳性结果。因此，PCR临床应用必须要有严格的实验室分区、实验室管理和质量控制措施，只有在充分了解PCR测定的不确定性的基础上，采取相应质控措施，才能确保实验结果的准确性，而不致出现重大判断失误。因为PCR扩增，其得到极大的检测灵敏度，但同时其对检测中的错误也有极大的放大作用。因此，对于PCR检测结果的报告必须慎重，尤其是在该结果会产生重大后果的时候，如重大感染性**、遗传病、法医物证鉴定、亲子鉴定等，必须在有相应严格质控措施（如内质控、阴性和阳性质控）的情况下重复测定，才可以报告结果，并做出实事**的解释。

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