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常规离心技术功能在医学实验室的需求
确定实验室的主次技术需求及相应离心方法的情况下,选择离心技术的基本参数是*大
rcf
、
rpm
、样品量,要考虑离心机的选型、主要功能及辅助功能的配置。
医学实验室常规离心技术功能需求
RNA
离心制备
培养细胞在低速离心(水平转头,300xg)完成细胞分离、裂解后,加RNA沉淀提取液,于4℃ ,10000~12O00xg(角转头,微量1.5/2.0ml Eppendorf管,或≥15ml、50ml管)分步提取;组织样本需先经匀浆预处理。
DNA离心制备
水平转头,2 000xg左右,1.5/2.0ml Eppendof管,15ml、50ml Falcon管或更大体积;再经12000~27000xg。制备质粒DNA:角转头,250ml或500m1/瓶,5000-6000xg;15-50rnl/管,12000~27000xg;4℃或特定温度。
载体表达蛋白分离
角转头,250~500ml/瓶,4000xg;15~50ml Falcon管,3O00xg;角转头,50ml管/瓶,27 000xg;4℃。
细胞纯化和亚细胞器分离
用差速离心法分离细胞器和大小差别悬殊的细胞。由低速分步到高速离心,细胞器的沉降顺序是细胞核、线粒体、溶酶体、过氧化酶体、内质网、高尔基体、核蛋白体,所有过程控温4℃ 。
收集细胞:水平转头,850~1 850xg,优选锥形底管;分离细胞核和细胞质,3 300xg;核提取,25O00xg。进一步纯化分离将联用超速离心。
密度梯度速率沉降法分离密度相近而大小不等的细胞或__细胞器。采用合适的密度梯度介质,水平转头,1OOxg左右。等密度梯度法分离细胞器,10000-30O00xg。
细胞学涂片离心
通过在个别机型上配置细胞学涂片离心转头,实现一次4片离 12,;据细胞学特性,rc啦制在5O~1 000xg。选购时需注意离心容器的*小样品处理量。
离心超滤、浓缩、抽提
配合市售离心过滤浓缩管(1.5~80ml,Coming,Millipore,Spectrum等)或样品抽提容器使用,采用角转头或水平转头,角转头可使超滤膜与离心力不成直角而避免浓度极化;1 000~l2 O00xg不等,可参考所购容器的使用说明。
微孔板离心
酶标板、TC板、PCR板以及样品抽提纯化板的离心,在通用离心机可通过在大容量水平转头上配置微孔板吊架(rcf_-般将低于转头的额定值)或选用专门离心转头实现,≥1 O00xg。每个吊架可放1~4块标准96孔板或更多。
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