体视显微镜介绍----体视显微镜专题
一、历史
**台体视显微镜是由Cherubin d'Orleans于1671年制造的,不过并不是真正意义上的体视显微镜,因为需要附件透镜才能得到正立的像。
19世界中期,伦敦的Francis Herbert Wenham**次制作出了真正的体视显微镜。几年后,John Ware Stephenson制造了与Francis相似的显微镜(见图1)。
早在19世纪80年代,美国仪器设计师Horatio S. Greenough发明了**的光路,成为现代体视显微镜的前身。Greenough说服了Carl Zeiss公司生产体视显微镜。
20世纪上半叶,体视显微镜(也称解剖镜)的设计非常像传统的复式显微镜。沉重,主要由黄铜制作,利用棱镜形成正立的像。
**个现代化体视显微镜由美国光学公司(American Optical Company)于1957年生产。称为Cycloptic。铝制机身,工作距离连续可调,中间变倍,物镜放大倍数从0.7X-2.5X 分5个级别。并且有多种附件,包括机身、镜臂、照明。遵循了20世纪50年代的灰色设计(见图2)。后来Cycloptic这些特征被称为CMO(Common MainObjective)。
两年后(1959年)Bausch &Lomb制造了另一款体视显微镜,有**的优势:连续调焦变倍、放大倍数连续可调。称为Stereozoom。这是**款没有利用棱镜就能成正立像的体视显微镜(见图3)。与Cycloptic在大小、形状上相似,相似的工作距离放大倍数0.7X-3X。在成本上更节约,且较轻。
20世纪60年代,Nikon、Olympus、Unitron和其他日本厂家开始生产连续变倍体视显微镜(Stereozoom)。日本、美国和欧洲显微镜厂家不断发展、改进体视显微镜,后来结合了高速计算机,能够**控制变倍,处理复杂的难题,并使用高度光学校正的元件。
现代的体视显微镜具有高数值孔径的物镜,高眼点的目镜,视场数高达26mm,大的变倍比(高达12X-15X),放大范围更宽(2X-540X),人机工程学设计。
二. 体视显微镜的设计
体视显微镜大体分为两类,每种各有优劣(详见原文)。老的体视显微镜系统,即Greenough发明的光路,利用2个物镜,分别走2条光路,进入2个目镜分别成像。较新的系统即CMO(以上介绍的),利用1个大的物镜,按一定角度分为2条光路,进入2个目镜成像。两类显微镜都可以改变放大倍数,连续变倍。(见图4)
三、体视显微镜的放大:物镜、目镜
体视显微镜放大倍数是物镜X目镜X中间变倍X附件透镜倍数。
中间部分有时设计成滑块或转盘式的物镜转换器,便于转换物镜倍数。这在过去的体视显微镜中很流行,现在不多见了。
*高质量的体视显微镜是安装了中间变倍透镜组的,用于改变放大倍数。(如图7)
早期体视显微镜只能放大7X-30X,现在学生用的体视显微镜也能放大2X-70X了。中间变倍的体视显微镜可放大250X-400X,更**的研究级体视显微镜可超过500X。工作距离从20-140mm,增加特殊的附加透镜,可达到300mm或更大。附加透镜可接在特殊设计的物镜口上(图8),用于改变放大倍数和工作距离。
现代体视显微镜配备宽视野、高眼点目镜,放大倍数5X-30X。常在目镜上配胶皮眼罩,避免观察者的眼镜直接接触到目镜。屈光度可调,瞳距55-75mm。视场(FOV,Field of View)由物镜倍数和目镜的视场光阑尺寸决定。FN(Field Number)即目镜的视场光阑直径,在出厂的时候已经固定,所以视场与物镜倍数相关。增加物镜倍数,视场变小;相反,减小物镜倍数,视场变大。例如使用10X目镜,低倍物镜(0.5X)时,视场范围约为65-80mm(取决于中间变倍),比复式显微镜的视场范围更大(使用相同目镜、物镜时,视场范围约40mm)。但大的视野要求更高的照明亮度,也往往难以使整个视野均匀照明。
四、分辨率和景深
与其他光学显微镜一样,体视显微镜的分辨率(D)取决于照明的波长和物镜的数值孔径。
分辨率 (d) = 0.61 × λ / (n × sin(θ))
其中d为*小分辨距离,λ为照明波长,n为物镜和样品间的物质折射率,θ物镜孔径角的一半。
表1显示典型的体视显微镜的物镜放大倍数、工作距离和数值孔径。过去,一些厂家给出物镜放大值的颜色(color code)。
表1 体视显微镜物镜参数
Stereomicroscope ObjectiveSpecifications
Objective Magnification | Color Code | Numerical Aperture | Working Distance (Millimeters) | ED Plan 0.5x | Red | 0.045 | 155 | ED Plan 0.75x | Yellow | 0.68 | 117 | ED Plan 1x | White | 0.09 | 84 | ED Plan 1.5x | Green | 0.14 | 50.5 | ED Plan 2x | Blue | 0.18 | 40 | Plan Apo 0.5x | N/A | 0.066 | 136 | Plan Apo 1x | N/A | 0.13 | 54 | Plan Apo 1.6x | N/A | 0.21 | 24 |
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改变目镜倍数并不会改变分辨率,只能改变放大倍数,却不会增加观察到的样品细节。所以高倍目镜(放大倍数30X或更高)只是空放大。为了对比显微镜之间的差别,分辨率常用每毫米的线数(lp/mm)表示。如Nikon 1.6X物镜,分辨率达630lp/mm。
附加透镜放大倍数为0.3X-2X,可以改变工作距离和分辨率。通常,分辨率与附件透镜的放大倍数成正比;视场范围与放大倍数成反比;景深与放大倍数成反比;工作距离与放大倍数相反,但不成线性比率关系。另外,使用附件透镜,在绝大多数情况下,对图像亮度没有显著的影响。
五、显微照相术和数码成像
Greenough和CMO体视显微镜都可以利用传统的显微照相术(胶卷)和数码技术成像。图9为Nikon先进的研究级体视显微镜,既可以接传统的胶片拍照,也可以连接数码相机成像。