常见问题
原因
对策
DNA条带模糊
DNA降解
实验过程避免核酸酶污染
电泳缓冲液陈旧
电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,PH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。TBE建议使用10次就更换缓冲液
所用电泳条件不合适
电泳时电压不应超过6V/CM,温度<30℃,巨大DNA链电泳,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液的缓冲能力,注意经常更换
DNA上样量过多
减少凝胶中DNA上样量
DNA含盐过高
电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分
有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白
DNA变性
电泳前勿加热,用TE缓冲液稀释DNA
出现片状拖带或涂抹带
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往PCR体系需要优化,PCR程序需要摸索。
其对策有:调整PCR体系和PCR程序,摸索出合适的条件。
不规则DNA带迁移
电泳条件不合适
带弱或无DNA带
DNA上样量不够
增加DNA上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高,上样量可适当降低
DNA跑出凝胶
缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
EB染色的DNA,所用光源不合适
应用短波长(254nm)的紫外光源
DNA带缺失
分子大小相近的DNA带不易分辨
增加电泳时间,核准正确凝胶浓度
电泳前勿加热,用20mM Nacl 缓冲液稀释DNA
DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适
在脉冲凝胶电泳上分析
电泳时Ladder扭曲
配胶的缓冲液和电泳缓冲液不是同时配置
同时配置,电泳缓冲液高出液面1-2mm即可
电泳时电压过高
电泳时电压不应超过6V/CM