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大鼠Wnt-2b蛋白(WNT2b)酶联mianyi检测试剂盒使用说明书
 使用前仔细阅读本说明书。本酶联mianyi试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测大鼠Wnt2B，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用    途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中Wnt2B测定。
工作原理
   本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联mianyi吸附法（ELISA）测定样品中大鼠Wnt2B水平。向预先包被了大鼠Wnt2B单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠Wnt2B，温育；温育后，加入生物素标记的抗Wnt2B抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成mianyi复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠Wnt2B的浓度呈正相关。
试剂盒组成
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存
说明书 1份 1份  
封板膜 2片（48） 2片（96）  
密封袋 1个 1个  
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品160ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
链霉亲和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
生物素标记的抗WNT2B抗体 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存
 
需要而未提供的试剂和器材
  1. 37℃恒温箱。
  2. 标准规格酶标仪。
  3. 精密移液器及一次性吸头
  4. 蒸馏水，
  5. 一次性试管
  6. 吸水纸
 
注意事项
  1. 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
  2. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差
  3. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  4. 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
  5. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
  6. 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
 
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
 
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作程序
  1. 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)
80ng/L 5号标准品 120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液
40ng/L 4号标准品 120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液
20 ng/L 3号标准品 120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液
10ng/L 2号标准品 120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液
5 ng/L 1号标准品 120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液
 
  2.根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
  3.加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗WNT2B抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）代测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗WNT2B抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。
  4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
 6.显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
 7.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
 8.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
 9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。 
 
操作程序总结：


试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
 
检测范围：
检测范围：2ng/L -90ng/L
 
保存条件及有效期：
 
保存：2-8℃。
有效期：6个月(2-8℃)。
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