产品名称：氯霉素测试试剂盒

氯霉素ELISA试剂盒酶联**法检氯霉素 1．简要信息此试剂盒可以定量检测氯霉素浓度。可做96个检测 2．应用领域此试剂盒是定量检测牛奶，蜂蜜，尿，血浆，蛋和肉等的氯霉素浓度，这个试剂盒适合于检测氯霉素以及它的葡萄糖苷酸酶（主要是尿的代谢物）。 3．使用方向此试剂盒是利用竞争酶联**方法检测b-agonists**残留，适合于检测人体，牛和猪的尿样，血清，以及眼，肝，饲料，牛奶和奶粉。 不需要样品纯化，对于尿和血清样品不需要前处理直接使用，对于其他生物样品的前处理也是非常快速的。 4．检测原理此试剂盒是在包被有绵羊抗兔IgG的塑料微孔板上操作，氯霉素标准品，样品，酶耦合物以及兔抗氯霉素抗体加入到微孔中。在培养期间，游离的氯霉素和标记有酶的氯霉素竞争于抗氯霉素抗体结合，抗氯霉素抗体和固定在微孔壁上的绵羊抗兔IgG结合。任何没有结合的酶耦合物在冲洗阶段，酶的活性由加入的显色酶底物的量决定。酶使无色的染色剂转变成蓝色，加入终止液后是微孔从蓝色变成黄色，然后通过450nm酶标仪读数，颜色的密度和样品中氯霉素的浓度成反比。 5．提供的试剂微孔板（12?8）：包被有绵羊抗兔IgG 标准液：6瓶不同浓度的氯霉素标准溶液（1ml容量），分别是0ppb，0.1ppb, 0.2ppb, 0.5ppb, 1ppb, 2ppb，白色盖子的玻璃瓶。 抗氯霉素抗体：12ml的蓝色盖玻璃瓶 酶耦合物(enzyme conjugate)：250ul的绿色安培瓶 10倍浓缩的冲洗液(washing buffer)：50mL的塑料瓶 发展液（developing solution）：24mL的塑料安培瓶 终止液(stop solution)：1瓶白色盖子的9ml溶液 酶偶合物稀释液（enzyme conjugate diluent）:12ml的玻璃瓶，红色盖子 氯霉素标准添加液（CAP spiking solution）:1毫升100ng/ml的80%甲醇水溶液 稀释缓冲液（Dilution buffer）:50ml的塑料瓶 6．实验需要但是没有提供的材料样品准备过程： - 正己烷 - 回转振荡器 - 旋涡 - 水浴锅 - 均质机 - 离心机 - 天平 - 乙酸乙脂 - 醋酸 - 异辛烷/氯仿混合物（2：3，V/V） - HELIX POMATIA JUICE 检测过程： - 20-200ul的可调**微量加样枪以及加样头 - 50-200ul的可调多道微量加样枪以及加样头 - 450nm的酶标仪 7．使用者需要的警告和注意点 - 只能做提外检测 - 试剂包含防腐剂，终止液包含硫酸具有腐 蚀性。酶偶合物也是有害的，标准溶液有小量的氯霉素是至癌的。由于浓度很低，所以标准品和CAP SPIKING SOLUTION是没有危险的。但是氯霉素标准添加液（CAP SPIKING SOLUTION）因为有甲醇存在，所以是有毒的并且是易燃的。 - 取试剂时要小心，避免接触到皮肤，眼睛和黏膜。 - 对于专职使用者可以使用索取**数据表 - 不要使用过期的试剂 - 不要混合不同试剂盒内的溶液 8．处理和存储介绍 - 在2-8℃储存，不能冷冻 - 把未使用的微孔条放回原来有干燥剂的铝薄袋，并且密封好。 9．样品准备 9．1血清和血浆样品 加1mL的样品到2ml的乙酸乙脂中混合1分钟，离心后，取1ml上层溶液（乙酸乙脂）到玻璃试管中，在50℃的氮蒸汽中蒸发。把蒸发后残留物质溶解在500ul的稀释缓冲溶液中（1?），样品添加量为50ul，所以稀释因子是1。 9．2尿和水 - 方法1（水和尿）：把PH值调到7?0.5后，样品可以直接加到检测孔中，或者可以先用稀释缓冲液（1?）稀释5倍或者10倍 - 方法2（尿）：滴加几滴1摩尔的醋酸把尿样的PH值调整到4.8，加25ul的HELIX POMATIA JUICE混合，然后在55℃培养2小时或者37℃过夜培养，把PH值调到7?0.5后加2ml的乙酸乙脂。在旋涡中混合1分钟，把两相分开，取1ml的上层液（乙酸乙脂）放在玻璃管内，然后在50℃的氮蒸汽中蒸发，把残留物溶解在500ul的稀释缓冲液中，稀释因子是1。 9．3肉，饲料和蛋 - 把4克均质样放在小管中 - 加6ml的乙酸乙脂，然后在旋转混合器（400转）中混合30分钟 - 离心10分钟后（2000转），取出3ml的乙酸乙脂相到试管，然后50℃的氮蒸汽中蒸发。脂肪残留物溶解在1.5ml的异辛烷/氯仿混合物（2：3，V：V），再加1ml的稀释缓冲液（1?），使用旋转混合器混合30分钟然后离心10分钟（2000转），为了取消上层溶液的泡沫等乳状液，把试管在80℃的水浴中静止5分钟，然后离心10分钟（2000转）。取50ul的上层液进行实验，稀释因子0.5倍。 - 也可以选择把脂肪残留物溶解在1.5ml的正已烷，再加1ml的稀释缓冲液，使用回转振荡器混合30分钟，然后离心10分钟（2000转），为了取消上层溶液的泡沫等乳状液，把试管在80℃的水浴中静止5分钟，然后离心10分钟（2000转）。取下层溶液为待检样，如果是带脂肪的猪肉，需要用正己烷再次提取5分钟，取下层溶液为50ul作为检测样，稀释因子是0.5倍。 9．4蜂蜜 - 取3克的蜂蜜到测试管，加1ml水，把蜂蜜样品放在60℃水浴中几分钟。加6ml乙酸乙脂，在回转振荡器中混合30分钟。离心10分钟（2000转），把6ml的乙酸乙脂转移到试管中，然后在50℃的氮蒸汽中蒸发。残留物溶解在1.5ml的异辛烷/氯仿混合物（2：3，V：V）和0.75ml的稀释缓冲液（1?）中，然后回转振荡器混合30分钟，再离心10分钟（2000转）。 - 注意：为了去除上层液的乳化泡沫物质，应该把离心后的样品在80℃的水浴中培养5分钟，再次离心10分钟（2000转）。 - 取50ul的上层溶液（4克/ml的蜂蜜）作为检测样。稀释因子是0.25倍。 9．5牛奶 - 牛奶样品在4℃下离心10分钟脱脂（2000转），加5ml的乙酸乙脂到2.5ml的脱脂奶中混合。然后旋涡混合1分钟，通过离心5分（2000转）使两相分开，取4ml的上层相（乙酸乙脂）到试管中，然后50℃的氮蒸汽中蒸发，残留物溶解在200ul的稀释缓冲液中（1?），稀释因子是0.1倍。 9．6 虾和鱼 - 称取50克的虾打碎均质，取10克均质后样品到测试管，加20ml的乙酸乙脂，然后回旋振荡器混合10分钟。混合后离心10分钟（10分钟）或者滤纸过滤，10ml的乙酸乙脂离心后转移到玻璃管，然后50℃的氮蒸汽中蒸发。 - 残留物溶解在2ml的n-己烷，并且加1ml的稀释缓冲液（1?），充分混合30分钟。为了消除溶液表面的乳状泡沫，把试管放在80℃水浴锅中培养5分钟，然后在2000转离心10分钟。 - 用巴斯德吸量管，把下层转移到清洁的玻璃管，加1ml的正己烷，充分混合5分钟，离心5分钟（2000转）。 - 取50ul下层液体做样品做检测，稀释因子是0.2倍。 10．工作溶液准备氯霉素标准溶液：即时使用 酶偶合物稀释液：即时使用 酶耦合物：根据需要检测的样品量计算出总共需要的量，用酶偶合物稀释液稀释200倍浓缩的酶偶合物。 抗氯霉素抗体：即时使用 冲洗缓冲液：对浓缩也1：10稀释（1 9），注意：当有结晶体存在时，在室温搅拌直至完全溶解 稀释缓冲液：用蒸馏水稀释缓冲液1：5（1 4） 发展液：即时使用，染色剂和发展液对光敏感，避免直接光照。 终止液：即时使用，注意：里面含有2M的硫酸，所以在操作时要小心，万一接触到皮肤和眼立即用水冲洗 11．酶联**操作过程 11．1操作前的需要注意 1．把所有试剂都恢复到室温后再使用 2．完成实验后把试剂马上放回2-8℃的环境 3．不要改变操作程序，特别是下面的情况： - 不要延长**次培养时间 - 不要在超过25℃的室温培养 - 培养期间不要振荡微孔板 - 使用**和正确的加样枪 4．一旦开始实验，不要中断实验 5．ELISA的重现性依靠冲洗过程的效率和一致性，所以要严格按照说明书中的冲洗过程来操作。 6．每次加样都要使用新的加样头，以免发生交叉污染 7．加样时不要使加样头接触微孔板中的液体或者微孔壁 8．培养时避免直接光照射，建议使用一块板盖住微孔板 11．2实验过程 1．预先准备好需要做的小孔数包括标准品，样品以及空白孔，*大结合率孔。 2．- 加150ul的稀释缓冲液到空白孔 - 加50ul的各个标准浓度标准品和样品到指定小孔 4．使用多道加样枪吸取50ul的酶耦合物到每个小孔。 5．加100uL氯霉素抗体到每个小孔（除了空白孔之外），轻轻摇微孔板几秒钟。 6．在室温培养30分钟（20-25℃） 不要在**个培养时间段延长时间 5．冲洗次序 - 倒掉小孔中的液体 - 用装有工作冲洗液的洗瓶充满整 个小孔，然后倒掉冲洗液- -重复刚才的冲洗程序5次 - 在吸水纸上倒扣微孔板并且重重的拍打微孔板，吸去多余的水滴 但是不能使小孔干掉 6．使用多道加样枪吸取200ul的发展液到每个小孔并且柔和的振荡几秒钟。 7．在室温培养15分钟（20-25℃） 8．使用多道加样枪吸取50ul的终止液到每个小孔，并且彻底的振荡几秒钟。 9．在450nm的光栅下用酶标仪读数，60分钟内必须读数。 12．结果计算 计算*大结合率的吸光度值（即0ppb），以及样品和标准品的吸光度值。把每个样品和标准品的吸光度值，*大结合率值（B0）减去空白的吸光度值。计算出减去空白值的样品和标准品吸光度值除以*大结合率吸光度值（0ppb）的比值，在乘以100变成百分比。因此*大结合率的值应该是100%，吸光度比值用百分比表示。 13．试剂盒参数描述 参数 平均空白吸光度 ≤0.15 OD450nm 平均Bo吸光度 ≥0.7 OD450nm B/Bo 50% 0.4-0.9ng/ml C.V.(%) 肌肉，蜂蜜和牛奶的回收率 ≤6 85-100% 氯霉素检测限 0.1ng/ml 14．整个实验需要的时间样品准备时间 试剂操作过程 血清/血浆 15分钟 45分钟 尿 3小时或者过夜 肉，饲料，蜂蜜，蛋，鱼，虾 2小时 牛奶 45分钟 15．特异性 I‘screen CAP试剂盒的特异性根据下面的交叉反应来决定的。 相关物质 交叉反应率 Chloramphenicol(CAP) 100% CAP glucuronide 70% 16．可选择的补充提取法 1．鱼和虾（低量的**选择法） - 取4克均质后样品到测试管 - 加6ml的乙酸乙脂，然后用回旋振荡器混合30分钟。 - 离心10分钟（2000转），转移其中3ml的乙酸乙脂到新的测试管，使用氮蒸汽或者空气蒸汽在60℃下蒸发干。 - 此脂肪残留物溶解在1ml的异辛烷和氯仿混合物（2：3；V/V） - 加0.5ml的稀释缓冲溶液（1?），旋涡一分钟，然后离心10分钟（2000转）。 - 为了消除溶液表面的乳状泡沫，把试管放在80℃水浴锅中培养5分钟，然后在2000 转离心10分钟。取50ul的上层液作为待检样，稀释因子是0.25倍。 2．蜂蜜（简单程序） - 称取2克蜂蜜样品到测试管，加4ml的蒸馏水，然后在60℃水浴中放置几分钟。 - 加4ml的乙酸乙脂，然后用旋转混合器混合30分钟。离心10分钟（2000转），把2ml离心后的乙酸乙脂转移到测试管，使用氮蒸汽或者空气蒸汽在60℃下蒸发干。残留物溶解在0.5ml的稀释缓冲溶液中。 - 取50ul（4克蜂蜜/ml）的提取液作为检测样品，稀释因子是0.5倍